如何选择*化的包被条件?

1.包被抗原的选择

包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。天然蛋白需经纯化才能用直接吸附

法包被，对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被(先用能够与目的抗原反应的物质如抗

体直接吸附在酶标板上，再通过特异性反应使抗原固相化)。经纯化的重组蛋白一般皆可直接包

板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物，由于分子量太小，往往难于直接吸附在

酶标板上，一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联，偶联物吸附于固相载体上。

2.包被液的选择

一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液，如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话，也可以使用

pH7.2的磷酸盐缓冲液。

3.包被温度的选择

通常是4-8度条件下过一夜或者37度保温2小时，我们强烈建议4-8度条件下包被，有利于蛋白

活性的保持。

4.包被浓度的选择

包被的Z适浓度随固相载体和包被物的性质变化，一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml，要明确

针对特定包被抗原的Z适包被浓度需要通过实验来确定。

包板后需要封闭吗?应该选择什么样的封闭体系?

封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。一般说来，双抗体夹心法，只要酶标

记物是高活性的，操作时洗涤*，不经封闭也可得到满意的结果。而在间接法测定中，封闭

一般是*的。

常用的封闭剂有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明胶、5%的脱脂奶粉，AbMART推荐使

用5%脱脂奶粉，价廉而且封闭能力强，不过5%脱脂奶粉只适合短期内使用，不宜长期保存，所

以试剂盒中较少使用。