干细胞培养过程中容易出现这样或那样的问题，这些问题都是在细胞生长方面来说，比如细胞的不贴壁、生长缓慢、生长不好，甚至死亡的原因，这些问题使得细胞研究者很是头疼，下面是针对这些问题的原因和解决方法：
一、培养细胞不贴壁
可能原因： 
1.*消化过度 ；
2.支原体污染 ；
3.培养基pH值过碱（NaHCO3分解）；               
4.细胞老化 ；
5.接种细胞起始浓度太低或太高 。
解决方法： 
1.缩短*消化时间或降低*浓度； 
2.分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物；
3.使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2 ；
4.启用新的保种细胞 ；
5.调节接种细胞浓度。
二、悬浮细胞成簇
可能原因： 
1.培养液中含钙、镁离子 ；
2.支原体污染；
3.蛋白酶过度消化使得细胞裂解；
4.DNA污染 。
解决方法： 
1.用无钙镁*洗涤细胞，轻巧吹吸细胞获得单细胞悬液；
2.分离培养物，检测支原体；
3.用DNaseI处理细胞。
三、培养细胞生长缓慢
可能原因：
1.由于更换不同培养液或血清； 
2.培养液中一些细胞生长必需成分如*或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏； 
3.培养物中有少量细菌或真菌污染； 
4.试剂保存不当； 
5.接种细胞起始浓度太低； 
6.细胞已老化； 
7.支原体污染 。
解决方法： 
1.比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液； 
2.换入新鲜配置培养液，或补加*及生长因子；
3.用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物；
4.血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清*培养液在2-8℃保存，需在1周内用完；
1.增加接种细胞起始浓度； 
2.换用新的保种细胞； 
3.分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
四、培养细胞生长不好
可能原因：
1.细胞本身的状态
细胞传代次数多，细胞老化；
细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；
细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；
*消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未*分离而成团，细胞死亡；
细胞的冻存与复苏：慢冻速融。
2.污染
支原体污染；
霉菌污染。
3.培养基或血清
更换血清或培养基之前未进行验证；
选择的培养基是否合适；
培养基配制是否准确无误。
4.培养环境
CO2供应是否正常；
培养箱或摇床温度控制是否正确。
解决方法：
根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案
1.注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；
2.避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；
3.要用合适的血清或培养基，经过验证；
4.注意实验室的环境。
五、培养干细胞死亡
可能原因： 
1.培养箱内无CO2； 
2.培养箱内温度波动太大； 
3.细胞冻存或复苏过程中损伤； 
4.培养液渗透压不正确； 
5.培养液中有毒代谢产物堆积 。
解决方法： 
1.检测培养箱内CO2； 
2.检查培养箱内温度； 
3.取新的保存细胞种； 
4.检测培养液渗透压； 
5.换入新鲜培养液。
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