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上海市所在地
中国仓鼠卵巢细胞(CHO)
细胞介绍:
1957 年从成年仓鼠的活组织切片中建立。
细胞特性:
1来源:仓鼠卵巢
2形态 :成纤维细胞样
3含量:>1x106个/mL
4污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5规格:T25 瓶或者 1mL冻存管包装
细胞接受后 的处理:
1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3)弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的*培养基。
4)如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的*培养基。
接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得。
中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤:
一. 培养基及培养冻存条件准备:
1)DMEM 培养基(GIBCO,货号 12800017,添加 NaHCO3 1.5g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞 处理 :
1) 复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加 1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并
检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM 条件下离心4分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量*,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
中国仓鼠卵巢细胞(CHO)注意事项:
1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。