人晶体上皮细胞永生系(SRA01/04)
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号 21875-091);北美胎牛血清，10% ; PS1%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入l0cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2.细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml*，细胞变圆脱落后，加入2ml*培养基终止消化，可使用血球计数板计数。lOOOrpm离心4分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至zui终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。将冻存置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
 
人晶体上皮细胞永生系(SRA01/04)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2ml*培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

人晶体上皮细胞永生系(SRA01/04)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注
意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。