ELISA试剂盒试验中呈现负值时的处理办法
时间:2018-04-07 阅读:174
A:1)ELISA试剂盒血清中有些细胞因子的检出率很低,血清中又富含许多大分子杂蛋白,在血清浓度较高时简单隐瞒抗原的表位,因此在测血清原液时常呈现负值。这即是在咱们的阐明书中主张检查血清时做1:2稀释的因素。除TGF-B1、sICAM-1、MMP-9、TIMP-1等要做高倍稀释外,其它一些细胞因子都要做1:2稀释(这在咱们的阐明书中有提示)。做法是:先在样本孔中加50ul试剂稀释液(试剂盒中已备),再加50ul样本。求出样本含量后需求乘上稀释倍数2。
2)ELISA试剂盒试验假如按上诉办法处理后检查仍有负值,则处理数据时可以采纳2个办法:
a:规范曲线只取规范曲线的下面4~5个点,即125,62.5,31.25,15.625,7.8,0,或62.5,31.25,15.625,7.8、3.9、0。原则是把样本的OD值全包含,规范曲线又能至少有4个点。也即是把规范曲线的下端(即样本含量会集的这一段)扩大,求出的数据更牢靠。
b:ELISA试剂盒人为的把“0”pg/ml点OD值下降。原则是把“0”OD值降到比zui低的样本OD略低一点,尽可能使样本的含量满是正值,一起确保变化“0”OD值后的规范曲线的相关系数(r)>0.98。这样变化后,通常样本都能得到数据,低的样本出来了,高的样本含量也会高一些。因为计算时是相对含量的对比,所以不会影响ELISA试剂盒试验计算成果。
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