一、挑选试剂
挑选质量优良的检测试剂，严格依照试剂阐明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。二、加样
可能原因：
1）血清或血浆标本别离欠好即进行加样； 2）手艺操作中，加样板过多形成加样后放入孵箱前等候时刻过长(特别是室内温度较高时)； 3）加完标本再加酶试剂时酶溅起孔外。
解决办法：
1） 标本为血清：将血液先天然寄存1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须运用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须当即倒置*混合5-10次，放置一段时刻后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要储存，则置于-20℃的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。 3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板外表轻拭吸干。 4) 如果选用AT或其他全自动加样，挑选FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时，请分批操作。
三、 孵育
可能原因：
1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸腾，吸附于孔壁，难于清洗*； 2) 孵育时刻人为延长，导致非特异性结合紧附于反响孔周围，难以清洗*。
解决办法：
1) 贴封片或加盖； 2) 按阐明步骤严格控制操作时刻。
四、洗板
可能原因：
1) 选用手艺洗板，孔与孔之间液体穿插。 2) 选用半自动洗板机洗板时，洗液量缺乏，导致洗板不*；洗板针阻塞，抽吸不*；洗板不畅，导致洗板效果差。 3) 反响板过多形成洗板等候时刻长。
解决办法：
1) 确保洗液注满各孔，洗板针疏通，洗完板后在吸水纸（挑选洁净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干； 2) 合理安排，或多用几台洗板机。
五、显色
可能原因：
1) 显色剂制造后放置时刻过长或运用过期显色剂； 2) 加显色剂时溅起孔外形成液体回流。
解决办法：
1) 显色剂尽量在临用前制造，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2) 加样时坚持显色剂不外流； 3) A、B液应防止触摸金属器械。
六、停止
可能原因如加停止液时发生较多气泡，导致假阳性添加。所以在加停止液时应防止发生气泡。
ELISA实验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的使用，但操作中的各个环节对实验的检测效果影响较大，如不留意，有可能导致显色不全、花板等成果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启示，进步实验质量。下面剖析ELISA实验操作中可能影响成果的原因，并给出相应的解决办法。