标准品的稀释与加样要点
时间:2017-04-21 阅读:458
1、ELISA试剂盒在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔平分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,ELISA试剂盒混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔平分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔平分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔平分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为30ng/L,20ng/L ,10ng/L,5ng/L, 2.5ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,别的各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,ELISA试剂盒然后再加待测样品10μl(样品毕竟稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄然晃动混匀。
3. ELISA试剂盒温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将20倍浓缩洗刷液用蒸馏水20倍稀释后备用。
5. 洗刷:留神揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔参与酶标试剂50μl,空白孔在外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗刷:操作同5。
9. 显色:每孔先参与显色剂A50μl,再参与显色剂B50μl,悄然轰动混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 中止:每孔加中止液50μl,中止反应(此刻蓝色立转黄色)。
11. ELISA试剂盒测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加中止液后15分钟以内进行。