Q1: 为什么噬菌体在摇瓶阶段没有被发现？

回复：在摇瓶阶段，一般不会往摇瓶里面通气。因此在摇瓶阶段染噬菌体的几率比较少。如果经过长时间培养后，空气中存在大量噬菌体，Z终也会导致摇瓶培养发生污染，这时需要对摇床内部做熏蒸等灭菌措施。

 Q2: 大肠杆菌发酵过程中,出现一定的自溶情况,镜检有空泡现象。但是平板检测，无噬菌斑出现。请问这是什么原因造成的?

回复：自溶情况是在培养哪个阶段发生呢？如果出现在培养中期就发生自溶，有可能感染噬菌体。涂平板检查是否有噬菌斑，应该尽量采用双层平板，效果较好。此外，在产物产量及其他发酵参数都正常情况下，是不是因为搅拌转速较高，到对数后期后会有一部分菌体发生自溶现象。

 Q3: 如果是接种的超净台环境中有噬菌体,是不会进入种子摇瓶啊?

回复：会的，接种时超净工作台风是又上往下吹的，所以一般在超净台内操作时，我们尽量减少瓶口敞开的时间，而且尽量将摇瓶斜放，减少超净台内的气体进入瓶内。

 Q4: 想知道处理芽孢染菌时为什么需要用碱水处理发酵罐呢?

回复：根据过去做过的实验，将分离出来的芽孢杆菌，分别在不同 pH 值培养基中进行培养，发现在酸性的环境里，芽孢杆菌能生长很好，而在碱性环境里却无法生长; 此外，若罐体内部存在一些结垢，经过稀碱水处理后，结垢将变得松散，从而内部芽孢杆菌也能够释放出来，便于灭菌杀死

 Q5:甲醇如何灭菌?

回复：纯的甲醇一般不需要除菌，本身应该无菌。如果是甲醇溶液，那需要除菌，但不是放灭菌锅内灭菌，而是过滤除菌。装甲醇的补料瓶需要放入灭菌锅灭菌，若担心灭菌效果不好，可加水灭菌。过滤除菌时一定慎选过滤器种类，必须为抗有机溶剂，以避免过滤器在过滤过程中被甲醇腐蚀，一般采用PTFE，PP，PVDF，PES材质都可以耐受甲醇。此外，甲醇过滤完也可以做无菌培养实验。过程操作务必小心，一旦甲醇挥发会有毒性。

 Q6:请问芽孢杆菌消灭剂是什么？84消毒液可以吗？

回复：当时使用的芽孢杆菌杀菌剂为诺福杀菌剂，内含过氧化氢、活性胶质银离子等等；84消毒液主要成分是次氯酸钠，效果有限，因此没有前者好用。

 Q7: 补料瓶未连接前玻璃接头接的是包扎的空气过滤器吗?

回复：补料瓶管线出来所连接的玻璃接头为公头，然后通过母头和公头连接两边管路。母头的一端需加过滤器，若无过滤器，也可采用包扎的方式。除菌过滤器用锡箔纸包住，主要防止灭菌过程中有冷凝水浸湿过滤器，同时可以保证此处的灭菌温度，棉花塞住不是太方便。

 Q8:罐内死角不容忽视，发酵罐联轴器形式，哪种死角比较少，螺丝用厌氧高温密封胶涂抹可以吗?

回复：进口发酵罐罐内不会有死角，此概念在设计中已充分考虑。一般发酵罐采用直连驱动马达，而细胞罐采用磁力驱动马达。该两种驱动轴设计上不会有死角，谨记使用过程中不要随意卸载或晃动搅拌轴，导致密封圈密封性不佳即可。 您所提及的螺丝是罐盖上面的吗？在搅拌轴上的是可以涂抹，能否告诉我你要涂抹是的哪些螺丝？ 此外，密封胶质量要有保证，不会在灭菌时进入罐内影响菌体生长和产物纯化

 Q9:芽孢杆菌及大肠杆菌在外观大小上区别为何?

回复：以枯草芽孢杆菌为例，大小一般为0.7～0.8×2～3微米，芽孢大小一般为0.6～0.9×1.0～1.5微米；大肠杆菌大小一般为0.4～ 0.7×1 ～3微米。

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