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适用范围【参考值】
1.试剂盒有效性判定:
(1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
(2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。
2.标本结果判定:
(1)阳性:标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。
(2)可疑:标本检测结果Ct值在35~38范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在35~38范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。
(3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。
参数规格:
产品名称:紫河车LAMP鉴定试剂盒供应商
英文名称:Placenta hominis
货号:YSP9475
产品规格:50次
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
实验过程:
一、脑膜炎败血金黄杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
三、脑膜炎败血金黄杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
ANG- II (Human angioension II ) ELISA Ki 人血管紧张素Ⅱ化汞 ACS(剧品)三羟基烷 98%Ehrlichiae spp.
ANG- I R(Human angioension I recepor Anibody) ELISA Ki 人血管紧张素Ⅰ受体抗体化汞 AR,99.5%(剧品)6-姜烯酚 分析标准品,≥90%Eikenella corrodens
Ang- I ELISA Ki 大鼠血管紧张素Ⅰ化汞 CP,99.0%(剧品)8-姜酚 分析标准品,≥95%Eimeria spp.
Ang- I (Mouse angioension I ) ELISA Ki 小鼠血管紧张素Ⅰ酸汞 AR,98.5%(剧品)10-姜酚 分析标准品,≥96%Elaeophora schneideri
ANG ELISA Ki 大鼠血管生长素酸汞 CP,98.0%(剧品)10-姜酚 95%Emmonsia parva
ANF(Human arial nariureic facor) ELISA Ki 人心纳素酸汞 GR,99.0%(剧品)6-姜酚 分析标准品,≥98%Encephaliozoon spp.
androgen ElISA Ki 大鼠雄激素红色 AR,99.5%(剧品)染料木苷 from Glycine max (soybean), ≥95% (HPLC)Enamoeba hisolyica
ANA(Human ani-nucleolus anibody) ELISA Ki 人抗核仁抗体黄色 AR,99.5%(剧品)番泻苷C 99%Enamoeba spp.
ANA(Human Ani-nuclear Anibody) ELISA Ki 人抗核抗体酸汞 AR,98.0%(剧品)铪粒 99.9% meals basis,1-10mmEneric Adenovirus41
ANA(Human ani-neurophil anibody) ELISA Ki 人抗中性粒细胞抗体 AR,99.5%(剧品)铌粉 99.5%,200目Enerinvasive E.coli(EIEC)
紫河车LAMP鉴定试剂盒供应商Mouse Anpep(Aminopepidase N) ELISA Ki培养基Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Ndnf(Proein NDNF) ELISA Ki木糖发酵管Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Kap(Kidney androgen-regulaed proein) ELISA Ki鼠李糖发酵管Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse IGFBP-7(Insulin-like growh facor-binding proein 7) ELISA KiFraser 肉汤增菌液基础Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Prnp(Major prion proein) ELISA Ki吖啶黄Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Gypa(Glycophorin-A) ELISA Ki萘啶酮酸Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Klk1b22(Kallikrein 1-relaed pepidase b22) ELISA Ki柠檬酸铁铵溶液Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Nfkb2(Nuclear facor NF-kappa-B p100 subuni) ELISA Ki吖啶黄Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse B4gal1(Bea-1,4-galacosylransferase 1) ELISA Ki萘啶酮酸Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Crry(Complemen regulaory proein Crry) ELISA Ki李斯特氏菌显色培养基Sandwich ELISA, Double Anibody