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R5421 感受态细胞100ul*50说明书
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面议操作方法:
一 、M15(pREP4) 感受态细胞100ul*10说明书热激转化法
1. 从-80℃冰箱取出感受态细胞冰浴融化后,吸取100μl感受态细胞转移到-20℃过夜预冷的摇菌管中,加入质粒或连接产物,轻轻混匀,冰浴30分钟。
2. 42℃水浴热激60秒,迅速放回冰中并静置2分钟,该过程不要摇动摇菌管。
3. 向摇菌管中加入900μl 37℃温浴的SOC或LB(SOC培养基可提高2-3倍转化效率),37℃、180rpm、45分钟复苏菌种。
4. 根据实验要求(质粒,重组连接产物转化),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收,倒置平 板,37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
二、10分钟快速转化法
注:在使用卡那霉素,四环素等作为筛选抗性时,需要在SOC培养基中复苏以提高转化效率,当使用氨苄青霉素作为筛选抗性时,该步骤可以省略。感受态细胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分钟后加入4倍体积的37℃温浴的SOC培养基,在37℃ 180rpm孵育1小时,然后转移到37℃预热的LB培养基上。
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2. DH 5α感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手EP管底轻轻混匀,冰中静置5分钟。
3. 用200μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上,涂均匀,表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
使用说明:
1. M15(pREP4) 感受态细胞100ul*10说明书取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30min。
3. 42℃热击45sec,然后快速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min,该过程不要摇动离心管。
4.每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床, 150 rpm振荡培养45~60min使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12~16h。
培养方法:
M15(pREP4) 感受态细胞100ul*10说明书收到细胞后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况,如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,留10ml培养液继续培养。
培养实验又要开始了,科研工作者又该忙碌了,大家可能都在寻找适合自己的细胞,不用急,我们帮您掌舵,让您满意!
传代方法:细胞*汇合时,倒掉旧液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,显微镜下观察细胞*脱离瓶壁分离成单个细胞后弃掉胰酶,加培养基混匀分瓶,T25瓶中加培养基至6-8ml,T75瓶加培养基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培养。
中文名称:M15(pREP4) 感受态细胞100ul*10说明书
规格:100ul*10
用途:生化试剂。(用于科研试验研究)
储存条件: -70℃保存,必须加干冰运输。自收货之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6个月。
外观:(性状) 干冰运输,单加10kg干冰费
单位: 袋
ELISA Kit for Human Interleukin-6 receptor subunit beta
96T31.2-2000 pg/mL人细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Intercellular adhesion molecule 1
96T31.2-2000 pg/mL人γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Interferon gamma
96T78-5000 pg/mL人胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Insulin-like growth factor I
96T0.156-10 ng/mL人胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Insulin-like growth factor II
96T0.156-10 ng/mL人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Insulin-like growth factor-binding protein 1
96T7.8-500 pg/mL人α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Interferon alpha-1/13
96T0.156-10 ng/mL人前列腺特异性抗原前体(proPSA)ELISA试剂盒人
ELISA Kit for Human Indian hedgehog protein
M15(pREP4) 感受态细胞100ul*10说明书人前列腺癌低转移细胞株;PC-3M-2B4
人肺巨细胞癌高转移细胞株;PG-BE1
人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7
人结直肠腺癌细胞;SW620 [SW 620;SW-620]
人脑星形胶质母细胞瘤;U-87 MG [U87MG;U87 MG]
人肺癌细胞;A-427 [A427]
人胰腺癌细胞;AsPC-1
人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞;C918
人髓母细胞瘤细胞;Daoy
人导管癌细胞;HCC38