鸡γ干扰素（IFN-γ）Elisa试剂盒实验原理
 

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的鸡γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ)，再与HRP标记的鸡γ干扰素(IFN-γ)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡γ干扰素(IFN-γ)浓度。

标本要求

    1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

   2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
120pg/ml

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

60pg/ml

4号标准品

150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

30pg/ml

3号标准品

150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

15pg/ml

2号标准品

150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

7.5pg/ml

1号标准品

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

鸡γ干扰素（IFN-γ）Elisa试剂盒操作总程序：
计算以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与  OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有
析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本  OD值
大于标准品孔*孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行试验。
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。

鸡γ干扰素（IFN-γ）Elisa试剂盒保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月