大鼠elisa试剂盒操作程序
时间:2020-11-04 阅读:259
大鼠elisa试剂盒原理:
采用竞争法测定金黄地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL水平。用金黄地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL抗原包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入标本及标准品,并加入HRP标记的OXLDL抗体,标本及标准品中的大鼠elisa试剂盒抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。反复洗涤后加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,颜色越浅。颜色的深浅和样品中的OXLDL含量呈负相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值),根据标准曲线,计算测试样品中OXLDL浓度。
大鼠elisa试剂盒操作程序:
1. 弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
2. 每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。。
3. 取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
4.测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
5.根据标准品大鼠elisa试剂盒的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。
大鼠elisa试剂盒样本处理及要求:
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血大鼠elisa试剂盒会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。