绵羊Ⅱ型胶原（Col Ⅱ）elisa分析检测试剂盒标本要求：

1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

绵羊Ⅱ型胶原（Col Ⅱ）elisa分析检测试剂盒操作步骤：

1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

绵羊Ⅱ型胶原（Col Ⅱ）elisa分析检测试剂盒操作注意事项：
1.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8.加入试剂的顺序应*，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。