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产品介绍：

RAPA3G SYBR Green qPCR Mix本制品是采用 SYBR Green 嵌 合 荧 光 法 进 行Real-Time PCR 的专用试剂，本 SYBR Green qPCR Mix将化学修饰的热启动 RAPA3G DNA 聚合酶、反应 Buffer、dNTP、SYBR Green 染料等试剂预混在一起，是一种 2×浓度的单组分预混试剂。该制品配有单独的 ROX 内参染料，可用于需要 ROX 进行孔间校正的定量 PCR 仪。RAPA3G DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶，其具有最高的杂质耐受性（对乙醇、胍盐、肝素具有高的耐受性），因此对于纯度较差的 DNA 模板，该 Mix 仍然可以获得理想的实验结果。RAPA3G DNA 聚合酶为化学法修饰的 HotStart版本，其在 50℃以下 100%无活性，只有 95℃条件下加热5min 后才能恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性 PCR 扩增，极大的提高了 PCR 扩增特异性。该试剂盒的反应缓冲液，可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。
包装
规 格
2×RAPA3G SYBR
Green qPCR Mix
50×ROX Dye
1ml （A2250A） 1 ml 200 μl
5ml （A2250B） 1 ml×5 200 μl
储存：
请避光置于-20℃以下可保存３年。该试剂经 30 次冻融后性能无下降，因此不使用时请置于-20℃避光保存。
操作方法
1. 根据机型选择步骤 A 或 B
A: 需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-TimePCR 仪，包括：ABI PRISM7900HT, 7300/7500/7500 FastReal-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P(Stratagene)等。按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系：终浓度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
50×ROX Reference Dye 0.4 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
注意：引物用量有时可提高到 0.8 μl 以提高扩增效率。B:无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-TimePCR 仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)； CFX96Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene等。按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系：终浓度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法，程序如下：
 Stage 1: 95℃ 5min*
 Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 20s 40 cycles
 Stage 3: Dissociation analysis
注意：由于该酶为化学修饰的热启动 RAPA3G DNA 聚合酶，必须于 95℃加热 5min 才能恢复酶的活性，该热启动步骤不能缩短时间。
3. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。

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