正式试验时，应别离以阳性对照与阴性对照操控试验条件，待检样品应作一式二份，以保证试验成果的准确性。有时本底较高，阐明有非特异性反响，可选用羊血清、兔血清或BSA等关闭。
在ELISA中，进行各项试验条件的挑选是很重要的，其间包括：
固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。当时常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在运用前均可进行挑选：用等量抗原包被，在同一试验条件下进行反响，调查其显色反响是否均一性，据此判明其吸附功能是否杰出。
包被抗体（或抗原）的挑选：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时刻及其蛋白量也有一定影响，一般多选用4℃18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，调查阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。关于大都蛋白质来说一般为1～10μg/ml。
酶符号抗体作业浓度的挑选：首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定（见酶符号抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶符号抗体别离为不同的稀释度）在正式试验体系里准确地滴定其作业浓度。
酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反响，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌效果，应留意防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是当时较为满足的供氢体。底物效果一段时刻后，应参加强酸或强碱以停止反响。一般底物效果时刻，以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜制造，尤其是H2O2在临用前参加。
现在，国内也有很多酶联免疫（ELISA）代测服务机构。