ELISA试剂盒剖析蛋白质定量的新方法
时间:2017-12-27 阅读:221
ELISA试剂盒生物学研讨离不开定量。关于必定定量,一般需求运用已知浓度的分子制造标准曲线。近来,研讨人员介绍了一种新方法,能运用串联质谱仪对多个蛋白质进行必定定量。
在MARQUIS方法中,关于每个待定量的肽段,研讨人员树立重同位素符号的肽段。他们以不一样的量混合这些肽段,并在组织或细胞裂解后立即将一种混合物参与每个生物样品中。研讨小组的负责人认为:“这是要害的一步。你要尽早参与这些肽段,这么重同位素符号肽段和内源肽段的丢掉可一同发作。
ELISA试剂盒随后以同位素试剂符号样品,并参与质谱仪中。每个肽段发作两个峰:“重”峰代表组成的(加标)肽段,而“轻”峰代表内源性蛋白。经过定量前者碎片化所发作的符号离子,研讨人员能发作每个肽段的标准曲线。今后他们能测定对应内源性肽段的信号,判定样品中存在多少分子。
研讨小组运用MARQUIS定量了EGFR信号通路中的*磷酸化。在几种配体影响今后,他们在多个时间点定量了EGFR网络内的磷酸化动力学,完结了EGFR磷酸化位点的定量对比,并证明了关于每种配体,受体磷酸化在性质上相似,但数量上不一样。他们还培养了胶质母细胞瘤异种移植物,并运用这种方法定量了EGFR激酶克制的作用。
ELISA试剂盒据介绍,MARQUIS能一同定量10个样品中多达100种肽段。这只需求一台串联质谱仪(如三重四级杆)、市售的同位素符号试剂,以及重同位素符号的组成肽段。每个人都能完结。咱们希望创建出一种恰当简略的方法,而不需求什么诀窍。