在运用前与室温平衡，再进行测定。在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶联络物后。抗原抗体反应的结束需求有必定的温度和时间，这一保温进程称为温育（incubation），有人称之为孵育，在ELISA试剂盒中似不恰当。
ELISA试剂盒属固相免疫测定，抗原、抗体的联络只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，参与板孔中的标本，其间的抗原并不是都有对等的和固相抗联络的时机，只要zui靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗刷进程非常重要，不充分的洗刷易造成假阳性。
3. 一次加样时间控制在5分钟内，ELISA试剂盒如标本数量多，举荐运用排枪加样。
4. 请每次测定的一起做标准曲线，做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定。
6. 在制作标准品、查看溶液工作液时，请以相应的稀释液制作，ELISA试剂盒不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8、ELISA试剂盒控制好每一步的操作时间。
假如对试剂准备不太留心，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有或许影响后边温育时间不行的疑问影响后边的操作。