免疫沉淀和免疫共沉淀

免疫沉淀

免疫沉淀（IP）是用来纯化和检测抗原时应用zui广泛的方法之一。免疫沉淀的基本原理非常简单。针对特异靶抗原的抗体（单克隆或多克隆抗体）可在细胞裂解液等样品中与靶抗原形成免疫复合体。之后免疫复合体通过固相化的抗体结合蛋白例如蛋白A 或蛋白G 被捕获至固相支持物上（例如琼脂糖珠）。

从溶液中捕获这个复合体的过程被称为沉淀。任何不被抗体沉淀的蛋白都被洗涤掉。zui终，结合的免疫复合体（包括抗原和抗体）成分被从支持物上洗脱下来，通过SDS–PAGE（凝胶电泳）进行分析，通常可结合Western blot检测来确认抗原身份。

免疫共沉淀

免疫共沉淀是免疫沉淀的延伸，其基于潜在的免疫沉淀反应来捕获并纯化靶分子，不仅包含初级靶分子（例如抗原），还可结合在样品溶液中通过天然相互作用与靶分子结合的任何其他大分子。因此，实验被称为免疫沉淀或是免疫共沉淀只取决于检测焦点是初级靶分子（抗原）还是次级靶分子（相互作用蛋白）。

优化免疫沉淀和免疫共沉淀实验

传统的免疫沉淀/ 免疫共沉淀操作过程会包含一些由于实验基本形式、抗体和相关化学试剂造成的缺陷。其中zui常见的问题是凝胶分析中抗体条带产生的干扰。在传统免疫沉淀过程中，抗体会被一同洗脱下来，导致在还原型SDS–PAGE 分析时产生重链和轻链条带（分别为50 和25kDa），这些会妨碍具有相似大小的IP 或CO–IP 产物的检测。对传统免疫沉淀过程的一些改进可以解决这样或那样的*局限。使用微型离心机旋杯或离心柱可以确保在使用小体积琼脂糖珠或其他亲和树脂时更有效地进行洗脱步骤和回收。通过将抗体进行共价固相化可以在洗脱抗原或共沉淀产物的同时不会将抗体片段一同洗脱下来。

 有很多的网友是咨询如何消除重链干扰问题，很多时候在实验的操作过程中通常会用到相同的一抗或同种属来源的一抗，这种情况下，WB实验中IP抗体变性后产生的重链和轻链都能够被二抗识别， 而此非特异的信号往往会部分甚至*掩盖目的蛋白的信号。Abbkine公司开发的IPkine特异性抗体二抗产品，可以避免IP抗体变性后重链造成的干扰；武汉爱美捷科技有限公司的IPkine特异性抗体产品可以将Protein A/G引起的这种干扰降到zui低。总而言之，使用IPkine特异性抗体可以获得zui干净的IP/co-IP实验结果。