丹磺酰氯作为生物胺的柱前衍生试剂
时间:2016-12-30 阅读:1117
丹磺酰氯(二甲氨基萘磺酰氯)是一种强荧光剂,可用于测定肽链的氨基末端,它能专一地与链N-端α-氨基反应生成丹磺酰-肽,后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光,可直接用电泳法或层析法鉴定出N-端是何种氨基酸。
性质:分子量269.5 DNS 又称二甲氨基萘磺酰氯。熔点 70-73 ºC,从己烷中析出黄毛橙色结晶。熔点66.5~68℃。溶于丙酮,苯,二恶烷等有机溶剂,不溶于水。用于测定胺、氨基酸及多肽或蛋白质的N-末端氨基酸。由于丹磺酰氯具有强烈的荧光,灵敏度比二硝基氟苯(DNFB)法高100倍,并且水解后的DNS-氨基酸不需要提取,可直接用于纸电泳或薄层层析加以鉴定。
丹磺酰氯原本是检测一、二级氨基酸的 荧光衍生试剂,生成的氨基酸衍生物可用反相高 效液相色谱进行分析 。近些年来生物胺尤其是多胺的研究倍受学术界关注。由于生物胺同氨基 酸类似,自身都没有荧光和紫外的发色基团,因此 都要经过衍生化才能在色谱仪器下检测出来。常 用的衍生试剂有邻苯二甲醛(PA)、苯甲酰氯、荧 光胺(FA)、笏酰氯(FM-I)、对酞内酰胺苯磺酰 氯(Phisy-I)、对酞内酰胺基苯甲酰氯(PB-I)等。 丹磺酰氯(Dns-I)作为液相色谱柱前衍生试剂具 有衍生操作简单、衍生物稳定性好、可定量完成磺 酰化反应、有较强的荧光和紫外吸收、灵敏度高、 反应范围宽、基体干扰不明显等优点 ,所以成为了生物胺液相色谱检测中应用zui多的衍生试 剂。本文以丹磺酰氯作为生物胺的柱前衍生试 剂,荧光检测器为检测手段,在反相液相色谱 种重要的生物胺进行分析。研究了丹磺酰氯作为衍生试剂使用时的衍生条件:衍生剂的浓 度、缓冲溶液的 pH 值、衍生温度及时间等因素对衍生反应的影响,并得到重要的衍生条件。
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