elisa试剂盒间接法是目前zui常用的方法之一，主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断，而该方法的操作步骤主要有：

1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；

2.次日洗涤3次；

3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；

4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；

6.zui后一遍用DDW洗涤；

7.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟；

8.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml；

9.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

间接法成功的关键在于抗原的纯度，另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性。