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江苏科特商贸---各类组织的取材技术

时间:2015-05-21      阅读:278

(皮肤和粘膜的取材  
    皮肤和粘膜是上皮细胞培养的重要组织来源,主要取自于手术过程中的皮片,方法似外科取断层皮片手术操作,但面积一般2~4cm2即可,这样局部*痕,若对烧伤皮肤进行上皮细胞膜片移植,可从大腿或臀部取较大皮片,可取2~4cm2皮片,但取材时不要用碘酒消毒;若培养上皮细胞,取材时不要切取太厚,尽可能去除所携带的皮下或粘膜下组织;若欲培养成纤维细胞,则反之。皮肤粘膜与外界相通部位,因表面细菌、霉菌很多,取材时应严格消毒,必要时要用高浓度抗菌素和适量两性霉素B漂洗、浸泡。  
()内脏和实体瘤的取材  
    内脏除消化道外基本是无菌的,但取材时要明确和熟悉所需组织的类型和部位,实体瘤取材时要取肿瘤细胞丰富的区域,要避开破溃、坏死液化部分,以防污染,尽量去除混杂的结缔组织,否则培养后,由于成纤维细胞的生长给以后的培养工作增加困难。

()血液细胞的取材  
    血液及淋巴组织中的血细胞、淋巴细胞的取材,一般多抽取静脉外周血,或从淋巴组织中(如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离细胞,取材时应注意抗凝,通常采用肝素抗凝,常用肝素浓度为8~10u/mL血,抽血的针筒也要用肝素湿润,若从血站取来的献血员的血液,因血站不用肝素抗凝剂,常用含枸椽酸盐抗凝,对此类血标本千万不能用含钙、镁离子的洗液来处理细胞,因此时的钙、镁离子可加速血液中*促进血液凝固而影响收获血细胞及淋巴细胞。此外要严格无菌,尽量新鲜使用。  
()骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材  
    取上述标本时,除严格无菌,注意抗凝外,还要尽快分离培养,一般无需其他处理,离心后,用无钙、镁PBS洗两次,再用培养液洗一次后即可培养,不宜低温存放。

()动物组织取材  
1
、鼠胚组织取材  
   
首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物,然后将其整个浸泡在含有75%酒精的烧杯中,5分钟后(注意时间不能太长,以避免酒精从口或其他通道进入体内,影响组织活力),取出动物,在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢,切开皮肤,用无菌操作法解剖取胚或用无菌*挟起皮肤、用无菌眼科剪沿躯干中部环形剪开皮肤,用*分别挟住两侧皮肤拉向头尾,把动物反包,暴露躯干,然后再固定,更换无菌解剖器材,采用无菌操作法解剖取出胚胎。  
2
、幼鼠胚肾(或肺)取材  
   
幼鼠采用上述方法处死消毒后,腹部朝上固定在木板上,先切开游离毛皮并拉开至两侧:然后采用无菌法打开胸腔取肺,或背部朝上固定在木板上,先将背部毛皮切开游离并拉向两侧,然后采用无菌法从背部打开腹腔取肾。  
(
)人胚体组织取材  
   
在局部先用碘酒后用75%酒精棉球消毒,无菌法取人胚肺(肾),方法与鼠类相同。  
(
)鸡(鸭)鸟类胚胎组织取材  
   
取孵化至适当胚龄(9~12天)的胚蛋,用照蛋灯在暗处灯检,若有丰富血管、胚体有运动的胚蛋,说明胚体发育良好,并用有色笔划出气室和胚体位置。将胚蛋置于蛋架上,先用温水清洗蛋壳,再用75%酒精棉球擦干,经碘酒、75%酒精消毒后,在无菌条件下采用无菌法用剪刀或中号镊子打开气室,沿气室边缘去除蛋壳,再用*撕去壳膜,暴露出鸡胚,再用弯头镊轻挑起胚头,取出胚胎,放入无菌平皿中,解剖取材。  


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