我公司技术专员特意为大家准备十几条ELISA操作的重点细节，阅读之后可以总结一下您在实验中有哪些重点被忽略掉了。热爱ELISA实验的新手们需注意这些细节：

1.不管是试剂盒，还是其它产品，在使用之前我们都要仔细阅读说明书。

2.同样的，一定要确定试剂盒是不是在有效期内。

3.按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）。

4.标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份。短期内无法实验者，注意低温保存。

5.ELISA实验中为了确定*信号和zui低背景应将捕获抗体（0.5-4μg/ml）和检测抗体（0.25-2μg/ml）在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。

6.标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。

7.一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的elisa操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。

8.根据检测标本数量确定所需试剂的量。

9.按说明书将所用试剂平衡至室温，配制所需试剂，DIY夹心法ELISA常见技术指南。

10.选择抗体时选择一个单抗和一个多抗进行配对；若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体；从同一家公司选择抗体对。

11.为了优化灵敏度，建议过夜孵育标准品和标本。

12.若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。

13.当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的Ig。

14.准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等。

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