IgG,鹅免疫球蛋白GELISA试剂盒技术指导

l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中鹅免疫球蛋白G（IgG）的含量。

l 有效期：6个月

l 保存条件：2-8℃

l 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被鹅免疫球蛋白G（IgG）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的鹅免疫球蛋白G（IgG）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

需要但未提供的材料 

1. 可在450nm处进行读数的酶标仪； 

2. 能精确吸取10-200µL的移液器； 

3. 可调多道（8）移液器（50－200µL）； 

4. 供可调多道移液器使用的试剂存放槽； 

5. 洗瓶或洗板机； 

6. 蒸馏水或去离子水； 

7. 1升的圆柱形量筒； 

8. 移液器：1和（10或25 mL）； 

9. 移液器枪头； 

10. 纸巾； 

11. 计时器，用以监控温育步骤； 

12. 处理池和消毒剂（例如：0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水）；  

注意事项

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室

温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中

不要让微孔干燥掉。 

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。 

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。 

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。 

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。 9. 不能使用过期产品。 

10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。  

保存： 贮藏于2-8°C。 

标本收集 

1. 本试剂盒可使用血清、血浆、细胞培养上清液、组织液标本。 

2. 室温（20－25℃）下保存标本不要超过8小时。2－10℃保存标本，不超过48小时。如

耽搁的时间更长，请在-20℃或更低的温度下保存标本。标本避免多次冻融，这样可能会损失蛋白活性，产生错误结果。 

准备工作

1. 浓缩洗涤液(20X)用双蒸水稀释成1X(至 500ml)。  

操作步骤 

试剂盒应平衡至室温（20-25°C ）再试验。     取出所需反应板。 

1. 加入10ul标准品(Standards)、10ul标本于相应反应板孔中。 

2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。轻轻混匀30秒，封

住板孔，室温温育 45分钟。 

3. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴

（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。 

4. 每孔加入100ul显色液， 轻轻混匀10秒，室温温育20分钟。 

5. 每孔加入100ul终止液（Stop Solution）。轻轻混匀30秒；30分钟内在450nm处读OD

值。  

以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。