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    酶联免疫吸附剂测定实验基本原理：
    1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
    2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
    3.在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，zui后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
    4.加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。
    由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 
      
    酶联免疫DIY夹心法实验技术指南：
1.选择抗体时选择一个单抗和一个多抗进行配对；若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体；从同一家公司选择抗体对。
2.为了确定信号和zui低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
3.标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。
4.一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml 到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
5.为了优化灵敏度，建议过夜孵育标准品和标本。
6.若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。
7.当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的Ig.
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