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ATCC细胞株的品质，EBV转化的绒猴白细胞,B95-8细胞国内细胞的价格。对于初做细胞培养研究的工作者来说，会经常出现细胞培养问题，公司在细胞培养问题方面做了些总结，希望对你们能有所帮助。
【EBV转化的绒猴白细胞,B95-8细胞培养液pH值变化太快】CO2张力不对。培养瓶盖拧得太紧。NaHCO3缓冲系统缓冲力不足。培养液中盐浓度不正确。细菌、酵母或真菌污染。
按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5％到10％。（2）改用不依赖CO2培养液，松开瓶盖1/4圈，加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度，在CO2培养环境中改用基于Earle’s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hank’s盐配制的培养液，丢弃培养物或用抗生素除菌。
【培养液出现沉淀，但pH值不变】用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来。冰冻保存培养液，用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后除菌，将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。
【培养液出现沉淀，同时pH 发生变化】细菌或真菌污染，丢弃培养物或用抗生素除菌。

【培养细胞不贴壁】*消化过度；支原体污染；培养液中无贴壁因子，缩短*消化时间或降低*浓度，分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

【悬浮细胞成簇】培养液中含钙、镁离子。支原体污染。蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放DNA，用无钙镁*洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液，分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物，用DNase I处理细胞。
【原代细胞培养物污染】原代培养组织在进入培养前已污染，培养前用含高浓度抗生素的*反复冲洗组织。
【培养细胞死亡】培养箱内无CO2。培养箱内温度波动太大。细胞冻存或复苏过程中损伤。培养液渗透压不正确。培养液种有毒代谢产物堆积；检测培养箱内CO2检查培养箱内温度；取新的保存细胞种；检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260–350mOsm/kg。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压，换入新鲜培养液。
【培养细胞生长减慢】由于更换不同培养液或血清。培养液中一些细胞生长必需成分如*或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。培养物中有少量细菌或真菌污染。试剂保存不当。
比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。
1）增加起始培养细胞浓度。
2）让细胞逐渐适应新培养液。
3）换入新鲜配制培养液。
4）补加*或生长因子。
5）用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。或用抗生素除菌。
6）血清需保存在-5℃ 到-20℃。培养液需在2–8℃避光保存。含血清*培养液在2–8℃7）保存，并在2周内用完。
8）接种细胞起始浓度太低，细胞已老化，支原体污染。
9）增加接种细胞起始浓度。
10）换用新的保种细胞。
11）分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
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