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偶联ELISA试剂盒与亲和素和*

时间:2015-05-25      阅读:193

偶联ELISA试剂盒与亲和素和*
一、亲合素主要包括卵白亲合素、链亲合素、卵黄亲合素及类亲合素等。后两种因其特异性亲合力低,研究不多,前两种目前已深入研究并得到广泛应用。
    亲合素又称卵白素或抗*,分子量为68000,pI 10~10.5;在pH9~13缓冲液中性质均稳定,耐热并耐多种蛋白水解酶的作用。天然亲合素为碱性蛋白,由4个相同的亚单位构成4聚体;每个亲合素亚单位通过其结构中的*残基与*中的Ureido环(I环)结合。因此,1个亲合素分子存在4个与*分子结合位点,其结合常数(Ka)高 达1015mol/L。通常,亲合素的活性单位是以亲合素结合*的量来表示的,即以能结合1ug*所需要的亲合素量为1个亲合素活性单位。一般1ug亲合素约含13~15个活性单位。
二、*又称维生素H,分子量244.31,存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物,*-羟基琥珀亚胺酯(BNHS)可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成*医学教育网整理化的产物。亲和素与*的结合,虽不属免疫反应,但特异性强,亲和力大,两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个*分子的结合位置,可以连接更多的*化的分子,形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和*与ELISA试剂盒偶联起来,就可大大提高ELISA试剂盒的敏感度。
    亲和素-*系统在ELISA试剂盒中的应用有多种形式,可用于间接包被,亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素,原用吸附法包被固相的抗体或抗原与*结合,通过亲和素-*反应而使*化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量,而且使其结合点充分暴露。另外,在常规ELISA试剂盒中的酶标抗体也可用*化的抗体替代,然后连接亲和素-酶结合物,以放大反应信号。
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