小鼠成纤维细胞生长因子ELISA试剂盒
时间:2015-05-04 阅读:208
小鼠成纤维细胞生长因子ELISA试剂盒原理:
此法采用定量夹心酶联免疫技术。抗体具体为FGF6已经被预先涂到微孔板。标准和样品吸入井和任何FGF6目前被绑定的固定化抗体。*共轭的抗体特异性FGF6除去任何未结合的物质后,加入到孔中。抗*蛋白共轭的辣根过氧化物酶(HRP)的洗涤后,加入到孔中。经过洗涤,以除去任何未结合的抗*蛋白的酶试剂,底物溶液加入到孔中,显色成比例的量的初始步骤中的约束的FGF6。彩色显影被停止并测量的颜色的强度。
小鼠成纤维细胞生长因子(FGF6)ELISA试剂盒Specificty:
此法具有较高的灵敏度和特异性好,检测鼠标FGF6。观察鼠标FGF6和类似物之间无显著交叉反应或干扰。
精度:
批内精密度(内检测精度):CV%<8%
三种已知浓度的样品进行了测试20次在一个平板上进行评估。
间精密度(精密检测间):CV%<10%
已知的三个样本20检测到的浓度进行了测试评估。
样品采集和存储:
血清:使用血清分离管(SST)和全血标本在室温下两小时或4℃过夜℃,然后离心15分钟,在1000×g下。删除上清即可检测,或分装和店内样品在-20°C或-80°C。但应避免反复冻融循环。
等离子:采集血浆中EDTA或肝素作为抗凝血剂。在2-8°C在30分钟内收集离心15分钟,1000×G。即可检测,或分装保存样本在-20°C或-80°C。但应避免反复冻融循环。
小鼠成纤维细胞生长因子(FGF6)ELISA试剂盒检测程序:
在使用前,将所有试剂和样品室温。再次离心样品解冻后测定前。据建议,所有样品和标准来测定一式两份。
1。准备好所有试剂,工作标准和样品在前面的章节中。
2。请确定井数的使用,并把任何剩余的井和入袋干燥剂,密封保鲜袋,将未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的标准和样品。封面用胶粘带提供。孵育2小时,在37℃下一盘布局记录标准和样品检测。
4。每孔中取出的液体,不洗。
5。向每孔中加入100μl*抗体(1倍)。盖上一个新的胶粘带。孵育1小时,在37℃下(*抗体(1X)可能会出现混浊。预热至室温,轻轻混匀,直到出现均匀解决方案。)
6。吸液的各孔和洗涤,共洗涤三次重复该过程两次。洗净,每孔填充洗涤缓冲液(200μL)使用喷瓶,多道移液器,歧管器,或autowasher,和,静置2分钟,*清除液体的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗涤后,清除任何剩余洗涤缓冲液的吸ordecanting。倒置板和涂抹对干净的纸巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白(1×)。量的微量滴定板,用一个新的粘接剂条。温育1小时,在37℃下
8。重复的愿望/洗涤过??程中,在步骤6的5倍。
9。将90μlTMB底物添加到每个孔中。孵育15-30分钟,在37℃下避光
10。一站式解决方案,每孔加入底物,轻轻晃动酶标板,以确保充分混合。
11。在5分钟内,设置至450nm,使用酶标仪测定各孔的光密度。如果波长校正,设置为540nm或570nm处。在540nm或570nm波长在450nm处的读数减去读数。该减法校正板的光学缺陷。在450nm处未经修正读数直接,可能会比较高,不太准确。
小鼠成纤维细胞生长因子(FGF6)ELISA试剂盒计算结果:
建议使用专业的软“曲线专家1.3”的标准曲线,这可以从我们的下载。
平均每个标准和样品的重复读数和平均减去零标准的光学密度。
标准曲线,通过减少使用能产生四参数逻辑(4-PL)的曲线拟合的计算机软件的数据。作为一种替代方法,建立标准曲线,对在y-轴的浓度通过绘制在x-轴为每个标准的平均吸光度,并绘制一个通过在曲线图上的点的*拟合曲线。该数据可以通过绘制的FGF6浓度与日志的OD值和*拟合直线的日志,可以通过回归分析确定线性化。此过程会产生足够的,但不太的适合的数据。