磷酸盐缓冲液的配制方法
时间:2013-06-14 阅读:459
磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline,简称PBS)的是常用于生物学研究的一个缓冲溶液。PBS可以为三种溶液的英文缩写,分别是磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution)、磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffered saline)及 磷酸盐缓冲钠(phosphate buffered sodium),其配制方法不同,pH值不同,发挥的生物学作用亦不*相同。
磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法:
称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,zui后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟),保存存于室温或4℃冰箱中。需要注意的是,通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100 u/ml*和*之后再调PH、定容、灭菌消毒。
PH 7.6 7.4 7.2 7.0
H2O 1000 1000 1000 1000
NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5
Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2
NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4
根据经验来看,新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间,可是在温度的影响下,尤其在夏天,其电离常数发生了改变,在经过昼夜的时间后,PH值会明显改变(我亲自测过偏酸)。所以做实验的同学可要注意了,PH值可能会影响实验结果,甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气,要加强实验条件控制问题。每次使用前用试纸测一下过夜了的PBS,如果发生偏酸或偏碱,注意重新换新液。