根据上海劲马技术部解析指导，elisa试剂盒解析了细胞爬片的保存固定方法，为实验者提供有利的实验参考数据，

elisa试剂盒提供：*的固定及保存方法：

（1）中性缓冲福尔马林（不必调pH）：

福尔马林（40%甲醛，用时加入过量碱式MgCO₃中和） 10.0 ml

Na₂HPO₄.12H₂O 1.9653 g

NaH₂PO₄.2H₂O 0.5460 g

加0.85 %NaCl溶液溶解，定容至100 ml。

（2）细胞固定：待细胞接近长成单层时，用镊子取出盖玻片，迅速于37℃PBS中漂洗2次，每次3-5秒，以清除血清。

（3）将盖玻片投入中性缓冲福尔马林溶液中室温固定30 min。

（4）用镊子取出盖玻片，PBS漂洗2次，每次3-5秒，晾干保存于-20℃备用。可长期保存，做实验时，取出片子，入PBS湿润后即可进行你的实验。

可以用于做免疫细胞化学（H.E.)或免疫荧光。

 细胞爬片固定以后要放在-20度的冰箱，1个月内可以用。

过氧化氢处理这一步，用三蒸水稀释商品浓度为30%的过氧化氢，然后室温下玻片放在其中浸泡10 min，是不是过氧化氢导致细胞严重脱片？

爬片应该用甲醇/双氧水，你的细胞极可能是过氧化氢导致严重脱片。

elisa试剂盒提供 本人比较喜欢用4%得多聚甲醛，20分钟很好用的。保存的时候注意片子晾干，不要挤压，防止粘片和碎裂。

 细胞爬片固定好以后，如果要保存，我们的做法是倒掉固定液，PBS漂洗后干片保存在4度，zui长半年没问题。

elisa试剂盒提供（1）用新鲜配制的预冷的4%多聚甲醛缓冲液室温固定15 min，PBS (0.01 mol/l，pH7.4)洗涤3遍后是否就可以进行免疫细胞化学染色了？

（2）爬片PBS (0.01 mol/l，pH7.4)洗涤3遍后是否能保存，怎样保存？

答：（1）洗过就可以做免疫组化了。

（2）固定过后自然干燥，不要洗，-20度保存。做之前再洗。

elisa试剂盒提供 细胞固定用丙酮或酒精，不要用4%多聚甲醛，以免抗原交联，这样组化时不用再抗原修复。细胞固定后可室温保存在丙酮中，不使之干燥。

1.  如果是检测膜上的物质,好象不能用酒精。

2.  适当密度后取出固定(丙酮-20固定10～20 min)，再进行免疫染色。

3.  一批细胞爬片，如果细胞爬片是在玻璃上，冷丙酮固定15-20分钟，然后放-20度，没有问题。如果细胞爬片是在24孔板或6孔板里进行，冷丙酮会腐蚀板子，4%多聚甲醛。

4.  细胞爬片用纯丙酮固定10分钟，取出干燥后用锡纸包裹，-70度保存。

5.  4%多聚甲醛固定后PBS水洗，自然干燥后用锡纸包裹，-20度冻存不超过1月。

6.  如果细胞贴壁困难，可将片子先用纯血清挂一层，凉干后再养细胞。

7.  可以买NUNC公司的细胞培养用盖玻片，商品名Thermanox Coverslips。高分子材料，耐高温灭菌，经过特殊表面处理，细胞容易贴附。可以用剪刀任意裁剪，使用效果好。

上海劲马有现货，不用国外定货。我使用后，觉得效果比玻璃盖玻片效果好很多。

8.  我们通常是把细胞玻片固定好后，用PBS冲洗干净，然后用酒精脱水（80%，90%，，酒精各一次，每次10分钟左右），然后放在烘箱里烘干，这是就相当于石蜡切片了，可以保存一定的时间。

这个方法我们试过的，保持一段时间后做，效果还是可以的。