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MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒自备材料以及操作过程详解

时间:2015-07-14      阅读:583

                 MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

产品简介:

MTT 比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂 盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性 的检测。MTT 检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水丌溶性的蓝紫色 Formazan 并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在特定溶剂存在的情况下,可

以被*溶解。然后通过酶标仪可以测定 570nm 波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快, 则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。

eMTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒采用了自主研发 Formazan solvent,使检测本底低,灵敏度高,线性范围宽。

产品组成:


编号

名称

CT0026

500T


Storage

试剂(A): MTT solution(5mg/ml)

5ml

-20℃ 避光

试剂(B): Formazan solvent

60ml

RT

使用说明书

1 

自备材料:

1 细胞培养液

2 *消化液

3 低速离心机

4、 96 孔培养板

5 细胞计数板或计数器

6 细胞培养箱

7 摇床

8 显微镜

9 酶联免疫检测仪

操作步骤(仅供参考)

1 细胞用含血清的培养液培养至对数生*,常规*消化液消化细胞(悬浮细胞无需 消化)

2 低速离心

3 用培养液重悬细胞沉淀,制备成单细胞悬液,并计数。

4 细胞接种于 96 孔培养板,一般接种密度为 300010000 个细胞/孔。通常细胞增殖实 验每孔加 3000 个细胞,细胞毒性实验每孔加入 6000 个细胞。具体每孔所用的细胞的 数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定。

5、 37℃ 5%CO继续培养或按照实验具体需要进行培养,一般培养 624h

6、 按照实验具体要求,给予 020μ干预药物处理,37℃ 5%CO2 继续培养至合适时间。

7、 弃培养液,每孔加入 10μl MTT solution 和 100μl 新鲜培养液,在细胞培养箱内继续 孵育 4h

8 弃培养液,每孔加入 110μl Formazan solvent,置摇床上低速振荡 10 min,使结晶物 充分溶解。如果紫色结晶较小或较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多, 溶解的时间会长一些。

9 在酶联免疫检测仪 570nm 测定各孔吸光度。


注意事项:

1、 MTT solution 尽量减少反复冻融的次数,当颜色变为灰绿色时,请勿使用。

2、 由于使用 96 孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,应注意蒸发问题。

3、 MTT solution 在低温情况下会凝固,置于室温或 2025℃水浴至全部融解后使用。

4、 Formazan solvent 可以-20℃储存,当产生沉淀或凝固时可以 37℃水浴孵育以促进溶  解,并且必须在全部溶解并混匀后使用。

5、 观察 formazan 是否*溶解,亦可以借助光学显微镜观察。

6 培养细胞时尽量细菌避免污染。

7、 应注意设立 OD 调零孔和对照。

8 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期: 12 个月有效。





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