MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒自备材料以及操作过程详解
时间:2015-07-14 阅读:583
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上海百蕊生物科技有限公司 -
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583次 MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
产品简介:
MTT 比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂 盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性 的检测。MTT 检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水丌溶性的蓝紫色 Formazan 并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在特定溶剂存在的情况下,可
以被*溶解。然后通过酶标仪可以测定 570nm 波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快, 则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。
eMTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒采用了自主研发 Formazan solvent,使检测本底低,灵敏度高,线性范围宽。
产品组成:
编号 名称 | CT0026 500T | Storage |
试剂(A): MTT solution(5mg/ml) | 5ml | -20℃ 避光 |
试剂(B): Formazan solvent | 60ml | RT |
使用说明书 | 1 份 |
自备材料:
1、 细胞培养液
2、 *消化液
3、 低速离心机
4、 96 孔培养板
5、 细胞计数板或计数器
6、 细胞培养箱
7、 摇床
8、 显微镜
9、 酶联免疫检测仪
操作步骤(仅供参考):
1、 细胞用含血清的培养液培养至对数生*,常规*消化液消化细胞(悬浮细胞无需 消化)。
2、 低速离心
3、 用培养液重悬细胞沉淀,制备成单细胞悬液,并计数。
4、 细胞接种于 96 孔培养板,一般接种密度为 3000~10000 个细胞/孔。通常细胞增殖实 验每孔加 3000 个细胞,细胞毒性实验每孔加入 6000 个细胞。具体每孔所用的细胞的 数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定。
5、 37℃ 5%CO2 继续培养或按照实验具体需要进行培养,一般培养 6~24h。
6、 按照实验具体要求,给予 0~20μl 干预药物处理,37℃ 5%CO2 继续培养至合适时间。
7、 弃培养液,每孔加入 10μl MTT solution 和 100μl 新鲜培养液,在细胞培养箱内继续 孵育 4h。
8、 弃培养液,每孔加入 110μl Formazan solvent,置摇床上低速振荡 10 min,使结晶物 充分溶解。如果紫色结晶较小或较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多, 溶解的时间会长一些。
9、 在酶联免疫检测仪 570nm 测定各孔吸光度。
注意事项:
1、 MTT solution 尽量减少反复冻融的次数,当颜色变为灰绿色时,请勿使用。
2、 由于使用 96 孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,应注意蒸发问题。
3、 MTT solution 在低温情况下会凝固,置于室温或 20~25℃水浴至全部融解后使用。
4、 Formazan solvent 可以-20℃储存,当产生沉淀或凝固时可以 37℃水浴孵育以促进溶 解,并且必须在全部溶解并混匀后使用。
5、 观察 formazan 是否*溶解,亦可以借助光学显微镜观察。
6、 培养细胞时尽量细菌避免污染。
7、 应注意设立 OD 调零孔和对照。
8、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期: 12 个月有效。