大鼠白介素2elisa试剂盒对胰岛移植大鼠长期存活效果的研究
时间:2015-08-12 阅读:275
胰岛移植长期以来被认为是治疗Ⅰ型糖尿病的一种颇具吸引力的疗法,并具有相当的优势。为了研究胰岛移植中tacrolimus,rapamycin和AntiIL-2antibody在啮齿类动物之间防止排斥反应的机理和现象,本课题选用Wistar大鼠为胰岛移植物的供体,C57BL/6(B6)作为移植受体,移植物经分离和纯化后被移植入受体大鼠的肾包膜下,为了更好的模拟临床胰岛移植的效果,根据EdmontonProtocol方案进行用药。
大鼠被随机的分为5组,依次是:control组,tacrolimus+rapamycin组,tacrolimus+AntiIL-2antibody组,rapamycin+AntiIL-2antibody组,tacrolimus+rapamycin+AntiIL-2antibody组.
实验方法:供体胰岛分离和纯化采用Wistar大鼠进行,胰腺组织经胶原酶P消化,通过Ficoll梯度离心分离纯化之后,在37℃(98.6°F),5%的二氧化碳温箱中孵育不超过2小时,将分离纯化后的胰岛细胞移植入C57BL/6(B6)受者大鼠肾包膜下,每只大鼠移植300-400个胰岛为宜。移植后每周三次对各组大鼠应用*进行尾静脉采血,测量血糖,每周三次,连续100天受体血糖水平不超过18mmol/L,即为长期存活。组织学检查:于胰岛细胞移植第10天和第105天大鼠肾脏做病理切片,10%甲醛包埋,石蜡包埋,苏木精-伊红染色,镜下观察组织学变化。糖耐量试验:术后两周,进行糖耐量试验,所有受体B6大鼠均给予20%葡萄糖(1g/kg体重)腹腔内注射,于注射前和注射后30,60,90,120min测定血糖,并与对照组糖尿病大鼠做统计学两两比较。外周血CD4+,CD4+T细胞亚群及IL-2含量试验并进行统计学分析。
结果:应用不同免疫抑制剂方案后,移植受体存活时间比较应用不同免疫抑制剂方案后,移植受体平均存活时间如下表,一般认为移植物存活时间超过100天即为长期存活。可以看出应用Tacrolumus+Rapamycin的组,存活时间约为140天左右,85.7%的大鼠存活时间超过100天,明显高于对照组(P=0.000),具有显著性差异(表6-1);应用Tacrolumus+Rapamycin+AntiIL-2antibody的组(n=7),移植受体存活时间平均约为161天左右,其中28.5%的大鼠存活时间超过200天,一只为109天,五只大鼠存活时间超过150天,两只超过200天,与对照组相比,(P<0.001),具有显著性差异。各组腹腔内注射葡萄糖后,对照组血糖浓度明显高于其他四组,60分钟以后,对照组血糖水平下降缓慢,直到120分钟仍然维持高血糖状态,恢复缓慢,另外四组中T+A+R联合用药组血糖zui终恢复到糖耐量试验前的水平,与对照组相比,有显著性差异,(P<0.001)。
结论:根据Edmontonprotocol,选择性的应用Tacrolimus,Rapamycin,Anti-interleukin-2antibody三种药物,防治移植术后机体免疫系统的排斥反应,均不同程度的延长了移植物的存活时间,其中以三种药物联合应用,移植物存活时间zui长。免疫抑制剂能够明显提高大鼠胰岛细胞移植的长期存活率,延长移植物存活时间,与对移植免疫排斥反应的抑制作用,并用各种相关指标显示出来。