显微课堂:荧光原位杂交技术(FISH)
时间:2024-12-24 阅读:15
FISH,即荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization),是一种非放射性的分子生物学和细胞遗传学结合的新技术。以下是关于FISH技术的详细介绍:
一、技术起源与发展
FISH技术起源于20世纪80年代末,在放射性原位杂交技术的基础上发展而来。它利用荧光标记取代同位素标记,形成了一种新的原位杂交方法。随着技术的发展,FISH技术不断完善,特别是在多彩色荧光原位杂交(mFISH)方面取得了显著进展,使得该技术能够同时检测多个基因,分辨复杂的染色体易位和微小缺失。
二、技术原理
FISH技术的基本原理是将荧光素直接或间接标记的核酸探针(或、等标记的核酸探针)与待测样本中的核酸序列按照碱基互补配对的原则进行杂交。通过洗涤后直接在荧光显微镜下观察,可以对DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的位置进行定性、定位、相对定量分析。
三、技术特点
经济安全:FISH技术不需要放射性同位素标记,因此更加经济和安全。
实验周期短:FISH技术具有较短的实验周期,探针稳定性高,特异性好,定位准确,能迅速得到结果。
灵敏度高:FISH技术通过多次免疫化学反应,使杂交信号增强,灵敏度提高,其灵敏度与放射性探针相当。
多色FISH:该技术可以在同一个核中显示不同的颜色,从而同时检测多种序列。
应用广泛:FISH技术不仅可用于已知基因或序列的染色体定位,还可用于未克隆基因或遗传标记、染色体变异、基因突变、基因拷贝数变化的检测。
四、临床应用
FISH技术在临床中具有广泛的应用,包括:
乳腺癌:检测HER-2/neu基因和17号染色体数目,有助于判断乳腺癌的预后和选择靶向治疗药物。
宫颈癌:检测TERC基因,有助于准确区分宫颈细胞高度癌前病变与低度癌前发育异常,预测CIN1/CIN2向CIN3发展的风险因素。
泌尿系统肿瘤:检测p16基因、3、7、17号染色体数目,有助于膀胱癌的早期发现和诊断。
产前检测:检测13、18、21、X、Y染色体数目,有助于诊断胎儿常见的染色体疾病。
综上所述,FISH技术是一种具有广泛应用前景的分子生物学和细胞遗传学结合的新技术。