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PCR仪、基因扩增仪、梯度PCR仪、实时荧光定量PCR仪、选购技巧指南!

时间:2011-05-17      阅读:2082

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。经过二十多年的发展应用,如今PCR基因扩增仪,成为医学,农业,食品,医药,检验检疫等领域的实验室常规仪器设备。由于它是新兴科学领域中发展起来的,且应用广泛,于是很多商家大量投入资金,购买新技术,对其进行研发生产。PCR仪核心的经过不断改进,已经越来越完善和智能化,仪器扩增时间从过去小时才可以完成的,缩短到现在只需几十分钟便可完成基因扩增实验。市场上不同厂家生产的PCR仪型号都是自己编写的,仪器的技术参数也各不相同,计算技术参数基本相同,价格却千差万别,于是给用户选择带来了困惑和麻烦。根据本人所接触和使用PCR仪器和毕业后多年从事分子生物器材PCR仪的销售。下面我将自己使用以及客户询问和反馈的信息,作一个PCR仪选购总结分享给广大用户!
一.PCR仪的种类有:
常规的普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR仪,实时荧光定量PCR仪四类!
二.PCR仪的工作模式,功能和应用领域:
1.普通PCR仪:是由主机,加热模块,PCR管,热盖,控制软件组成。根据DNA片段高温解链,降温配对聚合原理,通过循环改变加热模块的温度,微量不易于分辨的的DNA片段进行扩增成大量的DNA片段,从而对其进行分析鉴定。根据需要可结合电泳仪,水平电泳槽,一起应用。主要应用与医学临床检验,食品检测,科研机构,高等院校教学对遗传变异,基因表达等进行研究。
2.梯度PCR仪:工作模式和原理同普通PCR仪一样,它出了又普通PCR仪的功能外还多了一个梯度退火功能。DNA片段的扩增对温度的控制精度要求特别高,不同的DNA片段其退火温度不一样,通过计算DNA片段中的CG碱基的含量只能初步的判断出*退火温度在+5℃范围内,如果用普通PCR仪进行研究,需重复扩增很多次,然后做电泳进行分析来确定*退火温度。而梯度PCR仪则只需要一次就可以完成,在节省了时间的同时提高了实验的可靠性和准确性。主要应用于科研机构,医学临床研究,高等院校,病毒分析,疾控中心等。
3.原位PCR仪:是由主机,加热模块,玻片,热盖,控制软件组成。主要是应用对细胞或组织内的DNA片段进行原位扩增分析-即定位分析。无需将细胞破碎提取DNA,细胞内有DNA酶的作用扩增受到一定的影响,使用不是很普片。主要用于医学临床研究,如癌细胞等。
4. 定量PCR仪主要由两部分组成,一个是PCR系统(普通的PCR仪原理相同),一个是荧光检测系统组成。与普通PCR仪,梯度PCR仪相比,无需做电泳分析,实验一步检测完成。根据荧光检测系统的通道不同,可分为单通道,双通道和多通道。多色多通道检测是当今的主流趋势--仪器的激发通道越多,仪器适用的荧光素种类越多,仪器适用范围就越宽;多通道指可同时检测一个样品中的多种荧光,仪器就可以同时检测单管内多模版或者内标+样品,通道越多,仪器适用范围越宽、性能就更强大,价格也Z为昂贵。客户可根据自己的需要进行选择,如果没有用到多通道的,建议不要购买,等于购买了无用的功能,建议购买2或者3通道的就已经满足够用。荧光检测系统主要包括激发光源和检测器。激发光源有卤钨灯光源、氩离子激光器、发光二极管LED光源,前者可配多色滤光镜实现不同激发波长,而单色发光二极管LED价格低、能耗少、寿命长,不过因为是单色,需要不同的LED才能更好地实现不同激发波长。监测系统有超低温CCD成像系统和PMT光电倍增管,前者可以一次对多点成像,后者灵敏度高但一次只能扫描一个样品,需要通过逐个扫描实现多样品检测,对于大量样品来说需要较长的时间。主要应用领域,动物疾病检测:禽流感、新城疫、口蹄疫、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等、炭疽芽孢杆菌。食品安全:食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。科学研究:医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究、大学及研究所等
三、国产和进口PCR仪的比较:
1. 仪器性能:进口PCR以,和国产的PCR仪,在技术和使用性能上基本上没有多大的差别,比如:升降温速率,孔间温差,温度均一性,梯度温度范围,热盖温度等性能指标,国内外仪器基本达到了相同水平。而其差别主要是在功能上的差别,价格确实相差几倍。
2. 仪器功能:进口和国产仪器主要功能:如保存,过温保护,断电保护,热盖功能等基本上是一样的,只是附带功能上有所差别,比如:进口的显示屏是大型的触摸式荧屏操作,国产的大多是触摸键,荧屏显示操作,进口仪器有的可以升级为荧光定量PCR仪,而国产的目前主要是机。而这些仪器附带功能的差别大多都是Z近两年新推出来的,价格确是相差几倍。有的进口仪器没有这些附带的特殊功能,从性能和功能上比有的等于或低于国产的,比如:上海领成的TCT3型梯度PCR仪成交价格3万以内,进口的同等性能和功能指标的仪器,成交价格却是4-5万元以上。
3. PCR仪的模块:模块是影响实验的主要因素,升温快慢,温度均匀性,直接由它来实现的,而影响实验的主要因素是温度的控制,于是很多商家都从模块上下功夫对其更进。从Z初的铝合金模块,发展到银模块,但是银容易被氧化,于是就在银槽上镀上一层黄金,产生了镀金银槽。银模块的导热性能的确比铝合金的提高了差不多一倍,缩短了升降温时间,从而缩短了扩增实验,提高了工作效率,快速PCR仪就在这种情况下诞生的。价格却比原来的仪器贵了好几万。比如原来铝合金的成交价是:7万元,换镀金银槽后价格成了9万多。镀金银槽的成本真的有那么贵吗?有的人认为上面的黄金很贵,其实上面的黄金不到1克,现在1克的黄金才200元不到。价格贵算不了什么,只要实用性能高就好。但是升温速率高了,温控精度就会有所下降,这无疑也对实验的特异性扩增带来了影响,如果一个实验非特异性过高,那么实验室失败的。再加上镀金银槽价格昂贵。这也就是市场上使用的大多是铝合金模块较多的原因所在。有些PCR仪设计成可更换模块的PCR仪,价格也比不可更换的要高2万多,而且还要另外花3万购买一个模块才实现模块的更换,作为一个严谨的科研工作者,花这样的多余钱是没有必要的,通常用0.2ml的96孔模块的PCR仪就已经足够了,也是*的选择,因为,0.1ml的量太少不利于控制量,会降低特异性;0.5ml的使用试剂量太大,试剂价格比较昂贵,会增加研究成本,所以0.2ml的模块是*的选择。模块的设计原理,市场上大多进口的梯度PCR仪模块的设计都是使用热能的梯度传递来设计的,而美国ABI的梯度PCR仪是通过单独的每排温度控制来设计的,能实现真正的梯度温度设计。如果经费许可以考虑美国ABI的Veriti 96孔梯度PCR仪,经费不足可以购买国产的TCT3型领成梯度PCR仪,这是*的配置选型方案,也是近年来客户使用反应的配置。
4. PCR仪性能参数的选择技巧:上海领成生物科技的TCT系列梯度PCR仪,工作温度范围:1~99℃,是根据PCR技术的三个热过程:高温模板变性(90℃~95℃)、低温引物退火(42℃~62℃)、适温引物延伸(65℃~75℃)的要求,同时考虑到其他方面试验要求而确定的。而变,退火,延伸三个过程的温度选择取决于温度与时间,取决于酶的活性、引物的长度、碱基组成及其浓度,还有靶基序列的长度。在温度范围符合的条件下,接下来就是看仪器的控温精度。如:上海领成生物科技有限公司生产的TC系列PCR扩增仪,BLOCK(模块)升降温速率(Max.):≥4.0℃/sec、样品升降温速率(Max.):≥3.5℃/sec、温度显示精度:±0.1℃、温度准确度:±0.2℃、温度均匀性(孔间温度偏差):±0.2℃,这些主要技术参数都达到了*水平,可以与“PCR仪*”美国ABI、美国伯乐和德国Eppendorf相比。
5. 附带功能选择:很多商家为了突出自己仪器的优点,把卖点指向仪器的附带功能上,市场上PCR仪主要参数都是满足实验要求,达到实验目的,很多用户把选择的标准方到了仪器的其他附带功能上。比如文件的存储量,不影响实验的使用效果一般梯度PCR仪在800个已经很大了。又比如升级荧光定量PCR仪,觉得没有这个必要,因为升级的没有专门做荧光定量的PCR仪性能那样的稳定和可靠。而且升级实时荧光定量PCR仪也是还要另外增加昂贵的升级费用才能用,再一个实时荧光定量PCR仪,每年都有新的产品,技术也在不短的更新。如果现在不用,将来用的话,还不如到用的时候才买。到时价格会更低。例子很简单:就如现在的手机一样,功能很多的,价格很贵,但是有好多功能都不用的,一年过后又有新性能的手机推出,原来贵的价格又变很低了。所以我建议购买PCR以时,进口品牌以美国ABI的PCR仪(2720型PCR仪、Veriti 96孔梯度PCR仪,step one实时荧光定量PCR仪)为参考标准,功能简单,性能稳定,价格合理。购买国产的PCR仪以上海领成的PCR仪(TCG3型领成科研型PCR基因扩增仪、TCT3型领成梯度PCR仪、TC988C领成科研型实时荧光定量PCR仪)为参考标准,功能和性能可以和大多数进口品牌相比。
四、安装调试及售后服务:
PCR仪不再向几年前那么的奥秘,也并非想象中的那么难,现在的PCR仪已经普及化,已成为实验室常规的仪器设备。安装调试也非常的简单,特别是普通PCR仪,梯度PCR仪在仪器出厂前都经过严格的检测和调试好的,使用客户使用时只需接通电源就可以使用。很多客户担心仪器安装调试问题,于是宁愿花贵几千块钱,也要工程师上门安装调试,我觉得没有这个必要。包装箱里有使用说明书,如果使用过程中有什么问题一个就解决了,一个才几块钱,为什么要去多花几千块钱呢?而且PCR仪使用过程中只要您按照说明去操作,不要人为的用蛮力去摔打和用力去拧,一般是不会损坏的。所以客户在购买普通PCR仪和梯度PCR仪这类操作简单的仪器时无需工程师上门安装调试。他的使用和购买一台电视机使用一样的那么简单,没有必要去多花这几千块钱。维修及售后服务,仪器如果是出现什么异常的现象,可以给总部维修工程师或者是供方打,工程师可以根据你的描述指导你进行调试,如果无法调试的,在保修期内,非人为损坏的仪器的维修来回运费和维修费用由供货承担。就算是花高价和当地的代理商购买,仪器涉及到简单的调试他们会,但是严重损坏涉及到换零配件的,他们也是得递回总部来维修,因为只有总部维修配件和工具是Z集全的。
实时荧光定量PCR仪安装调试相对普通的PCR仪较为复杂,所以需工程师上门安装调试,安装调试费用也已经算在了仪器里面,客户购买后总部或者厂家的工程师会按照的时间上面安装调试。
五、结语:以上的推荐是结合多年来客户对PCR以使用情况和市场普及情况来进行分析总结的结果。
 
 

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