（货号：WLRB5001）

原理概述：

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在常温恒温下（42 °C），特殊修饰的反转录酶利用特异性引物DNA和模板RNA合成cDNA链，反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。适用于实验室级别的RNA扩增以及其他检测用途的RNA扩增使用。

引物设计：

建议使用长度在30-35 bp的引物，引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度；引物设计避免形成二级结构而影响扩增；扩增子长度建议在150-300 bp，通常不超过500 bp。

试剂盒组成：

100T/盒

试剂盒储存：

运输条件：低温运输；

储存条件：储存温度 ≤ -20 ºC，避光保存，避免重压、反复冻融；

产品有效期：储存条件下，有效期6个月。

操作步骤：提前将试剂盒所需组分取出，冰上或低温下融化（C buffer可室温融化），震荡混匀。

1) 向无菌0.2mL PCR管中加入20 μL C buffer、5 μL L buffer；

2) 加入2 μL上游引物、2 μL下游引物，再加入1.5μL dNTPs(10 mM)；

3) 向反应管中加入12 μL PR-core（步骤1~3可以混合后再分装至反应管中）；

4) 向反应管中加入5 μL核酸模板；

5) 最后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（加入B buffer反应立即被启动）；上下颠倒混匀后（请务必保证充分混匀），将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中：42 ºC恒温孵育，时间30 mins；

6) 反应结束后，加入50 μL酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提液，1:1混匀抽提反应液，12000 rpm离心5 mins，取5 μL上清进行琼脂糖凝胶电泳检测。

体系配制

注意事项：

• 为保证液体试剂组分活性，请保证储存温度 ≤ -20 ºC；试剂使用时请保持低温，避免高温放置过长时间；
• 在进行反应时请注意避免微量核酸染，并设置空白对照实验组。