如何进行流式细胞仪的标准化
时间:2023-03-17 阅读:94
如何进行流式细胞仪的标准化
流式细胞学检验技术的快速发展,为临床曾经不能明确的许多疾病提供了诊断依据,并且在病情评估、预后分层以及疗效监测方面做出了重要贡献,得到了临床医师和患者的广泛认可。但大规模的应用也暴露了许多问题,造成不同实验室之间甚至同一实验室内相同项目的检测结果可比性差,所以流式细胞学检验技术的规范化与标准化非常重要。
本部分着重介绍流式细胞“分析中”即仪器(Instrument)的标准化,以降低因仪器状态或分析方案设置不合理造成的检测结果误差,确保仪器性能符合行业标准以及不同实验室出具的检测报告结果一致,从而提高数据质量为多中心研究以及检验结果互认提供保障,这也是我们进行标准化的目标。
CAP/ISO15189质量体系作为临床实验室认可的两大主流机构,对流式检测设备都提出了明确的性能要求,CAP检查表COM.30525和COM.30550等条款要求流式细胞仪进行功能性核查及性能验证;FLO.25150,FLO.30250和FLO.30260等条款要求流式细胞仪每天进行光路和流路的监测,每个荧光检测通道每天进行校准以及确保荧光补偿得到正确设置。对于不同仪器检测同一项目的情况,两台仪器必须每半年进行一次比对。下面我们就一起看看在实际工作中怎么进行分析中仪器的标准化。
仪器标准化的目的是确保流式细胞仪每天都能按相同模式运行,维持仪器状态,有利于顺利完成检测和分析,并能保证检测结果的可重复性。适当的仪器标准化检测的主要参数是光学设置、电子设置(包括PMT/APD电压,荧光补偿)。
仪器光路的监测
每次开机时,用光路质控微球验证光路,通过仪器自带的QC软件,可以将每天的检测结果以Levy-Jennings图展示出来,便于及时发现参数失控情况。也可用Kaluza软件的QC功能统一管理质控结果。
仪器灵敏度和线性的监测
利用Rainbow Calibration Particles, 8 peaks可以全面评估仪器各荧光通道灵敏度和线性。高灵敏度可以保证弱荧光信号的检出,高线性度可以确保低强度信号和高强度信号按照同等比例放大。
检测器PMT/APD的校准
仪器通道荧光强度的一致性对重复获取数据很重要,通过运行标准微球校准每个实验方案的电压/增益,以保证每天各荧光通道的荧光强度保持一致。
荧光补偿的校准
正确的荧光补偿对于FCM至关重要,补偿的目的是去除多色荧光检测中的荧光重叠部分对结果的干扰。一般在初次对仪器设置时进行,然后在以后的工作中定期进行检测,检测的频率有一周或一月。如果仪器维护、重新校准及改动PMT电压时,则需要重新进行补偿设定。目前可以用商品化的标准补偿试剂来完成多色荧光补偿。
随着多激光多色的应用发展需求,荧光补偿调节的便捷性越来越受到客户重视,试剂也在不断的创新中,就拿小贝特色的干粉试剂来说,也提供了多色补偿试剂ClearLLab Compensation Kit,它包含十色干粉补偿管,可以配合补偿微球Versacomp antibody capture bead kit,使得补偿实验更容易结果更准确。
在仪器标准化方面,贝克曼库尔特提供相关试剂如下:
针对用户对于仪器标准化越来越高的要求,贝克曼库尔特新推出的一系列流式细胞仪都具有完善的自动化仪器质控和标准化的程序,从以下几个方面全面标准化仪器状态:
通道配置
激光功率
增益(电压)
平均荧光强度
CV值
激光延迟
自动L-J图绘制
程序运行结束后会自动生成QC报告,方便用户进行仪器状态的追踪及管理。
*文中所提及产品均为非医疗器械,仅供科研和工业使用。
河南奕宸仪器设备有限公司
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