真菌毒素检测介绍

真菌毒素：又称霉菌毒素，是一类无色、 无嗅、无味的化合物。霉菌毒素是霉菌在其所污染的食品中产生的有毒代谢产物。

真菌毒素广泛污染农作物、 食品及饲料等植物源产品。不仅能导致农产品霉败变质，营养物质损失，品质降低，更严重的危害是被污染的粮食和饲料将诱发动物以及人 类肿瘤发生。

在我国农产品及饲料中常见的、危害较大的真菌毒素有黄曲霉毒素、呕吐毒素（脱氧雪腐铺刀菌烯醇 ）、玉米赤霉烯酮／ZEN、伏马菌素、 猪曲霉毒素A等，这些毒素对农产品及饲料的污染在2002 年被世界卫生组织列为食源性疾病的重要根源。我国相关标准对食品(GB27 61- 2017) 和饲料 (GB 13078-2017) 中的真菌毒素*检测都做出了明确的规定，另外2020 版药典也提出了6类真菌毒素在中药检测中的要求。随着社会对食品安全重视越来越强，真菌毒素检测需求持续增加。

真菌毒素免疫亲和柱净化机理

免疫亲和柱利用抗原抗体特异性可逆结合的原理，将毒素杭体与凝胶共价结合，然后填充柱子。将样品提取溶液过 免疫亲和柱，与抗体分子有特异性结合的被固定，而非目标化合物则沿柱流出，再用甲醇将洗脱，根据待测物分子荧光特性，用专用定量荧光速测仪进行定量检测。

一，样品制备

参考《GB 5009.22-2016食品安全国家标准食品中黄曲霉凿素B族和G族的测定》。

1, 均质

准确称取20.0g粉碎的样品，加入100ml 70％甲醇 水（体积比）混匀，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min;

2, 提取

提取液用玻璃纤维滤纸过滤或5000r/min离心Smin，取10ml滤液加入20ml水稀释，混匀；

3, 过滤

用快速定性滤纸或玻璃微纤维滤纸或定量滤纸过滤，收集滤液，取15ml

注意：对千样品提取液(pH<6或pH>8)的样品， 需调节pH至中性， 并用玻璃微纤维滤纸／定量滤纸过滤； 对千浑浊难过滤的样品， 可用离心机离心使其分层

二, 样品净化

注意：整个纯化过程尽量不要让柱子液体流干！

1）取出免疫亲和层析微柱，将上方塞子取出剪断， 再插回亲和柱上

2）将柱子与泵流操作架上的玻璃针筒连接固定，去掉亲和柱下方堵头，用15ml水或pH7.4磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤1次，流速1.5ml/min;

3）将处理后的溶液上样， 使 液体以1.5 ml/min的速度流出；

4）用15ml水或pH7.4磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤2次，流速1.5ml/min, 直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体

5）用1ml甲醇洗脱，用样品瓶／玻璃试管接洗脱液， 流速1ml/min;

6）脱后液体可用于检测。

真菌毒素免疫亲和柱免疫亲和柱操作示意图

注意事项

1）对人体有害，应戴手套操作。凡接触到标样的玻璃器皿都要用5％次氯酸钠浸泡过夜。

2）不要使用过有效期的免疫亲和柱。

3）免疫亲和柱应在2~8它保存，不要冷冻。

4） 使用前，免疫亲和柱需至少提前半小时回温至室温(25℃左右）。

5）样本AFB1含量高千柱容量时，需适当降低上样体积。

6）要保证过柱的样品提取液pH在6~8之间，可用盐酸或氢氧化钠调整。

7）称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整，建议不少于1

保质期

1）4℃下保存期可长达两年；

2）生产日期见外包装盒

真菌毒素免疫亲和柱B1的检测

测定条件

色谱柱：Shim-pack GIST C18um, 4.6x250mm (P/N: 227-30017-08)

流动相：甲醇：水＝45: 55 (V: V)

流速： 1.0 mUmin

检测波长：激发波长360nm , 发射波长440nm

进样量：10 µL

柱温：25℃

真菌毒素免疫亲和柱ShimsenIAC产品特点

高度特异性单克隆抗体，具有高吸附能力；

柱容量大，提高了纯化效率；

易洗脱，达到低浓度样本浓缩效果

样品回收率稳定在78 % -9 5 %

样品回收率稳定在78% -95%

样品回收率稳定在78 % -9 5 % 纯化样品适用

于ELISA法，HPLC法等。