旋转混合仪用于血小板膜蛋白检测
时间:2021-11-08 阅读:26
试剂与仪器
抗 P-选择素单克隆抗体 SZ-2、SZ-51 由苏州大学医学院阮长耿教授馈赠; 钙离子载体 A23187( 分子式:C112H132CaMgN8O24) ,GM6001( 分子式: C20H28N4O4) ,环孢菌素 A( cyclosporin A,CsA) ( 分子式: C62H111N11O12) 均购自美国 Sigma 公司; FITC 标记的羊抗小鼠 IgG 二抗购自美国 Santa Cruz 公司; Ttramethylrhodamineethyl ester ( TMRE) ( 分子式: C26H27ClN2O7) 购自奥地利 Bender Medsystem 公司。低速离心机为中国安徽中科中佳科学仪器有限公司生产。电热恒温水浴锅为中国上海精宏实验设备有限公司产品。全自动三分类购自日本 Sysmex 公司。四维旋转混合仪购自中国江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司。流式细胞仪购自美国 Beckman-Coulter公司。
结 果
可明显促进血小板线粒体膜电位的去极化( r = 0. 99),并且同时促进 GPIbα 的酶切( r = 0. 99),但不会影响血小板活化指标 P-选择素的表达。这提示,线粒体可能是血小板酶切重要的调控位点,而CCCP 不引起血小板 P-选择素的表达,即不引起血小板活化的发生,这提示血小板酶切和活化是相对独立的信号通路。GPIbα 受体上酶切的位点高度保守,ADAM17 酶切 GPIbα 的位点位于 GPIbα 胞外近膜端 Gly464 和 Val465 之间,可能通过调控 ADAM17 的酶切活性和调控 ADAM17 作用底物的结构两种方式,单独或协同调控细胞膜受体的胞外端的酶切程度。但是目前血小板内调控ADAM17 的信号途径还不清楚,线粒体功能与血小板受体酶切之前的关系还未有报道。
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