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面议NanoDrop2000微量分光光度计
使用高能量氙灯(pulsed xenon flash lamp)可提供190~840nm的全光谱检测,且不需要暖机,开机后立即使用。搭配高感度CCD array检测器,检测吸收值可高达300Abs(dsDNA浓度2~15000ng/ul),大部分纯化后的核酸几乎都不需要稀释即可检测。
待测样品的均质性是NanoDrop2000微量分光光度计的高要求,一般核酸、蛋白质样品能在检测前以vortex mixer震匀为好,若无vortex mixer也应以pipette吸放数次混匀。若担心genomic DNA可能因前述动作而断裂,则改以55?C加热约一分钟,使样品在侦测前呈现均匀状态,以确保 2ul 具有代表性。
检测时选择不同检测模式,可以得到快速的结果:
● Nucleic Acid – 吸收光谱、230nm, 260nm, 280nm吸收值(换算成10mm光径吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸浓度。
● UV-Vis – 190~840nm间所有波长的吸收值及光谱(以1mm光径吸收值呈现)。
● A280蛋白质定量法 – 280nm吸收值(换算成10mm光径吸收值)、260/280 ratio及蛋白质浓度。仅适用于纯化后的蛋白质,须具有已知的质量消光系数(mass extinction coefficient)方可计算。
● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果,自动画出标准曲线并计算R square,待测蛋白质浓度。
* 蛋白质检测模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三种常见定量呈色剂,因呈色剂随时间会逐渐加深,使用前请详阅试剂说明书并制备不同浓度的标准品,在好时间内完成检测,以得到良好的标准曲线。每个标准曲线多可有七个标准品,每个标准品多可做五重复。
* 测蛋白质时样品体积需使用 2ul,每个样品检测后需以Kimwipes 低尘擦拭纸(编号: 34155 )擦拭15~20回,以避免呈色剂与蛋白质的残留。
NanoDrop2000微量分光光度产品描述:
NanoDrop ND-2000C为NanoDrop ND-2000的升级版本,ND-2000C具有ND-2000全部功能,除此之外,它还有以下突出特点:
1、检测耗时更短,仅需3秒钟;
2、具比色杯或者检测孔两种选择,适合检测各种类型的样本,包括易挥发性物质的检测;
3、检测范围更加宽泛,检测下限可低至0.4 ng/μl (dsDNA);
4、内置比色杯,可进行实时动力学曲线研究,或者OD600细胞浓度的测量。
ND-2000C技术参数:
检测孔测量时:
1、波长范围: 190-840nm;
2、波长精度: 1nm;
3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm);
4、其它: 1mm光程长度(可自动调整到0.05mm);
5、检测下限:2ng/μl(dsDNA);
6、检测上限:15000ng/μl(dsDNA);
7、吸光率精确度:0.002 absorbance (1mm光程);
8、吸光率准确性:2%(at 0.76 at 257 nm);
9、吸光率范围:0.02-300 (相当于10mm光程);
10、核酸检测周期:< 5s;
11、体积:14cm×20cm。