如何在酶标仪上进行 IMAP 磷酸二酯酶检测
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67次Molecular Devices 的 IMAP® 技术能对激酶,磷酸酶和磷酸二酯酶进行快速,均质和非放射性的分析,非常适用于分析开发和高通量筛选。IMAP 检测是基于磷酸基团与固定在纳米微粒表面的三价金属阳离子之间的高亲和力结合。可以使用 FP 与TR - FRET 两种读数方法来检测磷酸化底物与纳米微粒相互的结合情况。在 FP 方法中,当 IMAP 结合溶液与磷酸化底物结合时,肽的分子运动被改变,引起标记在肽上的荧光分子的荧光偏振效应 (FP) 增加( 图 1,左 )。在 TR - FRET 方法中,当存在磷酸化的荧光底物时,铽 (Tb) 供体能够与底物荧光受体发生荧光能量转移 ( 图 1,右 )。该方法使用时间分辨荧光 (TRF) 检测模式,能够消除了测定组分或筛选中化合物的荧光干扰,并且底物尺寸和浓度的选择更灵活。