在使用Teledyne ISCO的CombiFlash^®系统时，或者在纯化没有色团的化合物时，可以使用薄层色谱法（TLC）来定位收集到的馏分中的纯化化合物。

如果已知化合物的保留因子（R_f），则可以根据柱体积估计含有所需物质的馏分收集管。柱体积是装填柱的空隙（空余）体积。这一规格在所有RediSep^®色谱柱的色谱应用说明3中都有列出。

了解R_f和柱体积可以让您大致了解化合物可能位于哪些馏分收集管的范围。

二、一般方法

将待分离的化合物加载到TLC板上，并分离成几个种类。

控制参数

TLC的几个参数必须保持一致以获得良好的相关性。

• TLC溶剂应以体积比的方式量取，以便混合物在转移到梯度生成系统时保持恒定。

• 为了获得最佳结果，建议对层析室和板进行平衡。

• 推荐将板运行至距离板顶部1-4厘米以内，以实现良好的分离。

• 在运行板之前，应标记样品斑点位置和溶剂水平。

• 应在运行结束时标记溶剂洗脱高度和样品斑点位置。

• 在进行TLC时，层析室中的溶剂水平绝不能触及样品，并且应覆盖层析室以维持气相中的平衡。

假设

有几个假设：

• 色谱柱和TLC板使用相同类型的固定相。

• TLC方法中使用的溶剂与液体分离中使用的溶剂相同。

因此，液体分离必须是等度洗脱。

• TLC的Rf应小于0.5且大于0.1，如果不是这样，则可能需要不同的溶剂系统。

R_f值

Z_x — 斑点从其起始点（样品线）移动的距离。请参考图1和图2。

Z_f — 从原始溶剂线到最终溶剂前沿的距离。

Z₀ — 从溶剂线到样品线的距离。

图1：TLC起始

图2：TLC完成

柱体积相关性

一旦知道了混合物中某个组分的R_f，就可以与柱体积（CV）建立相关性。

如果R_f值在0.1和0.5之间，它可以被输入到以下公式中，以给出收集管的范围。

其中：

Volc — 柱的空隙体积。

Volf — 每个管中收集的馏分体积。

图3：TLC示例

图4：R_f和试管相关性计算器

五、参考