体外释放试验(IVRT)在产品开发以及纳米乳剂、悬浮剂、多囊脂质体和微球等复杂药物产品的监管评估中日益受到关注和重视，因为 IVRT 提供了有关药物产品的质量和性能的关键信息理想的 IRT 方法应能将药物产品关键质量属性(CaAs)的变化与药物的释放特性直接联系起来，从而提供宝贵的信息，确保批次与批次之间的质量一致性，促进对批准后变化的评估，并协助进行产品比较，以支持生物等效性的确定。

IVRT 是文献中列出的表征外用半固体制剂的方法之一。该测试并不一定与体内性能或生物利用度相关联；但它能让人深入了解产品性能以及因制剂特性而导致的产品性能变化。

图1. IVRT仪器-Teledyne Hanson Phoenix 干热扩散测试系统和干热扩散池

图2. IVRT仪器的各个部分

对药物的物理和化学特性进行了制表和评估。IVRP 在评估任何可能影响产品质量和性能的批准后工艺变更方面发挥着非常重要的作用。浸泡池系统的自动化相对较容易。在这项研究中，我们开发了一种方法，它甚至可以检测配方和生产过程中可能发生的微小变化，并验证了该方法的准确性、可重复性和选择性。在方法开发过程中，考虑并优化了以下步骤，以供进一步研究。

IVRT 方法是为检测不同批次之间的差异而开发的，但如果产品发生任何可能影响性能的变化，IVRT 方法都能充分显示出来。

a.受体介质的选择

b.膜的选择

c.选择取样时间点和重复介质实验

d.测试与参考

A. 受体介质的选择

如同行文献所述，"可使用适当的受体介质，如水溶性药物的水缓冲液或稀释水溶性药物的水醇介质”。因此，在确定基本检测方法后，方法开发的首要任务是测量原料药在几种溶剂中的溶解度，从磷酸盐缓冲溶液(PBS)等水溶液到异丙醇/PBS-50/50(v/v)等水醇溶液。目的是找出能在 IVRT 接收容器中提供沉降条件的溶剂。当受体介质具有相对"较高的溶解或带走药物的能力"，且受体介质"在试验结束时超过 cs(药物在释放基质中的溶解度)的 10%"时，就会出现沉降条件。通常会选择三种介质(包括水基和水醇基溶剂)进行进一步的NRT评估。至少必须保持沉降条件，受体溶液必须能够容纳超过最后一个取样点释放的物质量。理想情况下，受体溶液应能溶解 10 倍于测试期间释放量的物质。例如，如果测试结束时释放了 2 毫克产品，那么样品池中的受体介质至少应能容纳 2.1 毫克。受体介质最好能溶解 20 毫克。可使用的典型溶剂有乙腈、乙醇、甲醇和异丙醇与水混合。典型比例不应超过 80/20。应根据原料药的溶解度和化学性质选择溶剂。

使用不同介质进行溶解度分析：

表1. 溶解度研究结果

可接受的沉降条件是指实验期间受体介质中活性物质的最大浓度不超过其在受体介质中最大溶解度的 30%。沉降条件通常发生在介质体积至少是饱和体积 3-10 倍的情况下。为实现线性释放并检查至少 70%的活性物质释放情况，我们使用不同的介质进行了进一步的实验。在受体介质 pH 值为 7.4 的磷酸盐缓冲盐水中观察到了最大溶解度:乙醇(60:40)。在整个实验过程中，均按照欧盟标准达到了沉降条件。

B. 膜的选择

膜应确保产品和受体介质保持分离，以便确保测试配方在整个测试期间保持不变。膜不应限制活性物质的释放速度。膜应与药物产品配方兼容，不会与活性物质结合。膜有多种选择，包括最近切除的组织、组织结构、尸体组织和合成膜。影响选择适当膜的因素包括与测试材料的兼容性、可用性、可重复性、成本，以及重要的实验目标本身。合成膜在孔径、厚度和亲水性方面的变化是可控的。由于许多半固体产品的主要成分是水，因此通常使用亲水性/亲水性合成膜。在膜筛选过程中，通常会评估三种具有相同孔径的聚合膜。常用的膜有 Tuffryn Supor®(聚砜)、纤维素、Acetate Plus®(醋酸纤维素)、尼龙、聚四氟乙烯和聚碳酸酯。使用两张含 100% 样品的滤膜进行滤膜选择。0.45 微米的聚碳酸酯 Nuclepore 膜过滤器和 0.45 微米的尼龙膜过滤器被用于开发研究，两种膜获得的结果几乎相似。根据膜的可用性，进一步研究使用了0.45µ 尼龙膜过滤器。

C. 选择取样时间和重复介质实验

为确保药物的最大释放量，在 30 分钟到 6 小时的不同时间间隔内采集样品，采集条件如下。

发现 RSD% 和回归均在接受标准范围内。所有样本单元的斜率都在接受标准范围内。6 小时后的释放时间点达到饱和。为避免受体介质蒸发，所有的细胞培养皿都被封盖。观察到的结果显示所研究的时间点也是线性的，并且释放情况良好，结果如下。

图3. 药物释放曲线

根据上述结果，所有单元的 RSD%、回归和斜率都在接受标准之内。

D. 测试与参考

所开发的方法用于比较试验产品和参照产品在以下条件下的释放曲线，以显示制剂等效性。

该产品是为欧洲市场开发的。因此，采用了 EMA 准则来验证结果。根据 EMA 关于外用产品的质量和等效性的指南草案，测试产品和参照产品平均值比值的 90% 置信区间应在 90-111% 的接受区间内。上述结果符合接受区间，因此得出结论，试验产品和参照产品是等效的。

方法验证

验证的目的是证明所使用的测试方法适合其预期目的，并建立文件证据，高度保证该方法在整个过程中产生一致和同步的结果，并符合预定的质量属性。该方法针对以下参数进行了验证。选择性(空白和安慰剂干扰)、特异性、线性、精密度和准确度、回收率、膜惰性、中间精密度和剂量鉴别。

IVRT 方法验证研究摘要

IVRT 是一种评估半固体药物释放的有效方法。IVRT 可作为产品开发过程中的一种方法，也可在货架期研究期间评估产品质量，或作为批次放行的质量控制测试。它是将测试产品（仿制药）与参比产品（参比上市药物）进行比较以发现产品等效性的绝亻圭体外工具。Recipharm 已根据监管要求开发并验证了 IVRT 方法。作为一家全球性的 CDMO，Recipharm 能够为不同地区的客户提供产品开发、分析方法开发和验证活动方面的支持。Phoenix RDS VDC 系统提供了令人满意的结果，符合监管标准。

关于 Recipharm

Recipharm 是一家令页先的合同研发和生产组织(CDMO)，总部位于瑞典斯德哥尔摩。我们在法国、德国、印度、以色列、意大利、葡萄牙、西班牙、瑞典、英国和美国都设有研发和生产设施，并在不断发展和扩大我们为客户提供的服务。我们拥有约 9000 名员工，专注于为制药公司提供荃方位的服务支持，将产品从早期开发一直推向商业化生产。25 年来，我们在整个产品生命周期为客户提供服务，一次又一次地为客户提供制药专业知识并管理复杂性。尽管我们的业务遍布全球，但我们一如既往地开展业务，并继续以客户的需求为中心，提供物有所值的服务。这就是 Recipharm 的方式。