鉴定菌落如此高效,PCR降本不是说说而已
时间:2022-06-29 阅读:517
如果说PCR,也许只有研究人员比较熟悉,但如果说起核酸,相信没有人不知道。
PCR又称聚合酶链式反应 ,它是一种放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术手段 ,被广泛应用于各种领域,如核酸检测、病毒检测、亲子鉴定等。获得一小片组织 ,提取DNA再进行PCR扩增、比对,便可以获得相应的数据。
菌落PCR
常规PCR扩增需要进行细菌培养、质粒制备等多步操作后才能进行基因扩增,操作繁琐耗时较长,同时在反复的操作中DNA量损失也较大,产率较低。
菌落PCR与我们通常的普通DNA的PCR的不同在于,直接以单个菌作为模板。是一种可以快速鉴定菌落是否为含目的质粒的阳性菌落。操作简单,快捷,阳性率较高,在转化鉴定中较常见。
菌落PCR(Colony PCR)可不必提取基因组DNA,不必酶切鉴定,直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增,大大节约了时间和成本。
菌落PCR如何操作?
菌落PCR(Colony PCR)筛选基本步骤:
1. 单菌落挑取;
2. 菌落PCR反应;
3. 琼脂糖凝胶电泳;
4. 判断阳性克隆并测序;
常规操作过程是用小枪头挑取单个菌落,先在含抗性的培养皿上画线,然后蘸取单菌落到画线格里,蘸取完将单菌落插入反应体系中,进行后续PCR反应。
Bel-Art 菌落复制工具可以不费吹灰之力地完成繁琐的菌落复制任务,增加生产力。Bel-Blotter适合所有类型的96孔板,从平面、v形或圆形的底板转移到0.2ml薄壁PCR板和试管中。只需简单地将
Bel-Blotter放置在平板上,针尖就会吸收液体,每个针尖可吸收10µl的液体。然后将填充好的Bel-Blotter放入接收介质中,无论是平板孔、杂交膜还是琼脂即可完成菌落复制。
Bel-Art 菌落复制工具
菌落复制工具由聚碳酸酯制成;易于使用,可高压灭菌,灭菌后可重复使用。
应用:
可用于复制重组DNA文库、接种菌落杂交过滤器、PCR、噬菌体分型和其他应用。