人磷酸激酶1(PGK1)ELISA试剂盒操作步骤

一、人磷酸激酶1(PGK1)ELISA试剂盒操作步骤实验原理

人磷酸激酶1(PGK1)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被兔脂肪酸合成酶（FAS）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的兔脂肪酸合成酶（FAS）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

二、人磷酸激酶1(PGK1)ELISA试剂盒产品优势

1. 品种齐全、质量可靠、灵敏度高、稳定性好、操作简便

2.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3.重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

4.同城（上海）需要代测可免费上门取样，享送货上门的服务。

5.根据客户需求可以根据客户的要求定制ELISA试剂盒。

6.润裕生物可提供*的售前、售中、售后技术支持,为您解决实验过程中遇到的问题。

三、人磷酸激酶1(PGK1)ELISA试剂盒标本要求

1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将*碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。*后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

人磷酸激酶1(PGK1)ELISA试剂盒免费代测注意事项：
1.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2.实验中不用的试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
3.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
4.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
5.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
6.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
7.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
8.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
9.加入试剂的顺序应*，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
10.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

人Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA检测试剂盒免费代测操作步骤：
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加*标记抗体工作液 100μl(取1μl*标记抗体加99μl*标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)，37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同*标记抗体工作液) 100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

 
Elisa试剂盒注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间

控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值

大于标准品孔第1孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计

算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

本试剂盒只限科研，不得用于临床