1. 机器应安装在无强电磁场及辐射能量，周围温差变化较小的室内。为保证二氧化碳培养箱控温精度，建议在15-25℃的环境下使用。
2. 二氧化碳培养箱未注水前不能打开电源开关，否则会损坏加热元件。
3. 培养箱运行数月后，水箱内的水因挥发可能减少，需及时加水。
4. 二氧化碳培养箱可以做高精度恒温培养箱使用，这时须关闭CO2控制系统。
5. 箱内湿热环境易滋生细菌，可在1000ml水中加2ml新洁尔灭液，定期用酒精和紫外线消毒箱内空气，培养物酒精擦拭入箱内，减少箱内微生物滋生速度。
6. 显示温度超过置定温度1℃时，超温报警指示灯亮，并发出尖锐报警声，这时应关闭电源30分钟，若再打开电源（温控）开关仍然超温，则应关闭电源并报维修人员，并用空调降低周围环境温度。
7. 钢瓶开启前，一定要拧松减压阀，防止输气胶管爆破。钢瓶压力低于0.2MPa时应更换钢瓶。
8. 尽量减少打开玻璃门的时间。在打开二氧化碳培养箱内门时，应先关闭二氧化碳控制开关。
9. 如果二氧化碳培养箱长时间不用，关闭前必须清除工作室内水分，打开玻璃门通风24小时后再关闭。使用或长期不用重新使用机器时，在正式培养前应做污染检查。
10. 搬运培养箱前必须排出箱体内的水。搬运前应拿出工作室内的搁板和加湿盘，防止碰撞损坏玻璃门。搬运培养箱时不能倒置，同时一定不要抬箱门，以免门受损。
11. 二氧化碳零点是否飘移，可通过二氧化碳气体测试仪，从控制盘上的采样口采到培养箱内的气体，然后用气体色谱仪测得二氧化碳浓度。
12. 二氧化碳培养箱应有良好的接地装置，以保证安全。