岛津Lc-10AD液相色谱仪操作及维护保养规程

目的：建立Lc-10AD型液相色谱仪操作及维护保养规程，严格按规程操作，及时对液相色谱仪进行维护保养。

范围：适用于Lc-10AD型液相色谱仪的操作及维护保养。

职责：QC检验员负责实施本规程，QC负责人监督执行。

内容：

1.原理

液相色谱是用高压*将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂，缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由积分仪记录，得到的电信号-时间曲线。

2.系统适用性

按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，包括以下要求：

色谱柱的理论塔板数（N）：理论板数应高于各品种项下规定的小理论板数，若理论板数低于各品种项下规定的小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等）使理论板数达到要求。

分离度和拖尾因子：除另有规定外，分离度应大于1.5，T应在0.95～1.05之间。

3.仪器组成

本系统由Lc-10ADvp溶剂输送泵、手动进样阀7725i、SPD-10Avp紫外检测器、浙大智达N2000色谱工作站和电脑等组成。

4.准备
4.1根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（箭头一侧朝上）。

4.2检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常

4.3流动相用到缓冲盐时，先用10%甲醇水冲洗柱子60min，然后在换上缓冲盐。

4.4准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，用吸气减压装置脱气。

4.5按标准操作规程配制样品和对照溶液，用合适的0.45μm滤膜过滤。

5.开机

接通电源，依次开启泵，检测器（在进样前30min打开）、浙大智达N2000色谱工作站。

5.1 Lc-10AD泵操作

5.1.1逆时针转动泵的排液阀45°，打开排液阀；

5.1.2按泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以8ml/min(可设定)的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；

5.1.3将排液阀顺时针旋转到底关闭排液阀。如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。如气泡仍排不掉则用注射器抽流动相.

5.2参数设定

5.2.1 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认，按[CE]键退出到初始屏幕，[back]键返回，[FUNC]键更换设定项目。

5.2.2 流速设定：在输送泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

FLOW/PRESS      PRESSURE     P.MAX     P.MIN

       0.000            0            0          0

逐次按[func]键“FLOW/PRESS”项下“0.000”闪动时，输入流量后按Enter。P.MAX，P.MIN闪动，输入较高220和低0保护压力后，按ENTER。

5.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按5.1.3操作。

5.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。

5.3 浙大智达N2000色谱工作站设定

5.3.1打开电脑主机电源和屏幕显示器。

5.3.2按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，

 5.3.3选中需使用的通道，点击OK，进入色谱工作站按下“数据收集”页的[方法控制] 按钮，选择相对应的采集方法及保存路径。

5.3.4 方法控制

5.3.4.1进入色谱工作站界面后点击左上角方法.选择检测方法及数据保路径.注意更改文件前缀名（即样品的前缀名.一般为被检测样品首字母. ）

5.3.5.数据采集

5.3.5.1点击查看基线，按检测器ZERO键后，再点击零点校正，待基线走稳后，将进样阀手柄置“LOAD”处，进样，进样后将进样阀手柄转到“INJECT”位置，点击采集数据，工作站自动采集数据。

5.3.5 数据保存及处理数据

当样品中所有组分峰都出现后，按“停止采集”按钮，结束色谱信号文件的采集。进入离线工作找到相应的数据采集的保存路径查看图谱并处理数据.

6.关机

先点击停止查看基线然后用鼠标单击右上角关闭对话框关闭系统，选择关闭计算机，单击是。关闭检测器用纯甲醇充分清洗泵和色谱柱，色谱柱的冲柱时间一般为1-1.5小时左右.

7.维护保养

7.1紫外检测器应在进样前30min打开，样品分析完毕立即关闭。

7.2 检测时方法用到高度梯度洗脱时，要先单次运行一次。待基线平稳后方可进样，流动相用到缓冲盐时，要先用10%的甲醇水冲洗1h，才可换上缓冲盐。

7.3样品分析完毕，系统需用0.45µm滤膜过滤的纯甲醇冲洗1-1.5h，并用注射器吸取纯甲醇冲洗进样器，流动相中含有盐，要用10%甲醇水过渡冲洗1h，再用纯甲醇冲洗系统。

7.4若发现空载系统压力升高，可先下列步骤进行排除：

7.4.1将保护柱拆下，观察柱压是否正常，如果保护柱过滤芯片堵塞则予以更换。

7.4.2如更换保护柱过滤芯后仍不正常，再将色谱柱拆下，观察不连接色谱柱时压力。如仍然压力很高，说明柱子没有问题。

7.4.3 然后依次从色谱柱往进流动相的方向查找问题，拆掉单向阀上面的螺丝，观察压力变化，如果仍然有压力，则说明单向阀可能有问题。将单向阀拆下，观察压力变化，如压力正常，则将单向阀用甲醇超声清洗30min，然后安装再观察压力变化。

7.4.4 如问题仍然存在，可以考虑用5%稀硝酸水和纯异丙醇清洗系统或者更换单向阀，中间一定要用超纯水过渡，再用纯甲醇清洗，接上色谱柱用甲醇再次清洗系统。注：（5%稀硝酸水溶液超声时不要超过5min，因硝酸有腐蚀金属作用）

7.5 检测完样品间隔3小时之内可不用关闭检测器，若超过3小时可先关闭检测器，以减少氘灯能量的损耗。

7.6液相色谱仪四周应干燥清洁，切忌流动相或化学试剂溅到仪器上，产生腐蚀。

7.7每年校正一次，若产生异常情况或换氘灯，则必须再校正。

8.每次使用必须按要求填好仪器使用记录及维护保养记录。