其他品牌 品牌
经销商厂商性质
上海市所在地
参数规格:
产品名称:CTP2-CP4-EPSPS基因核酸检测试剂盒
产品规格:48T 0.1PCR管
产品货号:FS-P10723
产品分类:荧光探针法
产品运输:低温运输
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。
产品特点:
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性*定量方法,已得到的*,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,最终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
ATCC19897=CBS483.68=CCRC11466=DSM40147=IFO12模式菌株模式菌株: yes种属: Streptomyces│cremeus提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 0329生长条件: 28℃
-1492℃冰箱冻结;真空冷冻干燥
裂褐层孔菌培养基: 14模式菌株: no子实体提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 25 定期移植法
刺孢壳培养基: 14烟草发酵烟草提供形式: 冻干物模式菌株: no生长条件: 25-28℃ 真空冷冻干燥法;定期移植法
泡盛曲霉培养基: CM0015以淀粉为原料发酵柠檬。提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28-30℃ 真空冷冻干燥法
河豚素假交替单胞菌培养基: 471微生物/耐冷菌;产酶微生物/产蛋白酶、酯酶水样/海冰提供形式: 斜面培养物模式菌株: no生长条件: 15℃ 液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法;真空冷冻干燥法
依氏假交替单胞菌生物转化微生物/固氮菌模式菌株: no沉积物/表层沉积物提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: 471生长条件: 28℃
热带假丝酵母近海酵母模式菌株: no沉积样/秋茄根底泥提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: 513生长条件: 28℃
-1493℃冰箱冻结;真空冷冻干燥
大肠埃希氏菌培养基: 0033遗传研究提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 30℃ 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法
红色链霉菌生长条件: 28C培养基: CM0039提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no 真空冷冻干燥
链格孢培养基: 14模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 25 定期移植法
乳乳球菌研究分析模式菌株: no乳汁提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 55生长条件: 37
ATCC491=BCRC14868=CCUG24088=CIP102089=DSM20107=KCTC1441=LMG16327=NBRC3747=NRRLB-404模式菌株: yes安全等级: 1种属: Cellulomonas│udaCompost提供形式: 冻干物模式菌株培养基: 7
炭疽芽胞杆菌培养基: CM0116研究提供形式: 其他安全等级: 3模式菌株: no生长条件: 37℃ 真空冷冻干燥法
-1494℃冰箱冻结;真空冷冻干燥
植CDK6 (Cyclin Dependent Kinase 6) 周期素依赖性激酶6抗原VTG 鱼、青鳉鱼卵黄蛋白原抗体
龙胆苦苷CDK7/Cyclin H/MAT1 周期素依赖性激酶7抗原VSV-G tag VSV-G tag标签抗体
胆CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8) 周期素依赖性激酶8抗原VSIG4 T淋巴负调节蛋白抗体
猪去氧胆Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C) 周期蛋白依赖激酶抑制因子1C抗原VRK1 牛痘病相关激酶1抗体(丝氨/苏氨蛋白激酶VRK1)
去氧胆CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 ) 软骨糖蛋白39(多肽)VPS4a 液泡分选蛋白4抗体
芝麻素CEA(Carcinoembryonic Antigen )peptide 人癌胚抗原抗原VPS18 空泡分选蛋白18抗体
芝麻林素Cecropin 抗菌肽/天蚕素(多肽)VP2 重组猪细小病VP2蛋白抗体
标准品HER2 receptor(erbB-2 isoform 2) c-erbB-2受体抗原VNN1 血管非炎症分子1抗体
左旋多巴ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3) 表皮生长因子受体3(抗原)VMAT2 脑单胺类神经递质转运蛋白抗体
紫杉C-erbB-4/HER4/erbB-4 (epidermal growth factor receptor4) c-erbB-4癌基因抗原VMAT1/VAT1 嗜铬颗粒胺转运蛋白VAT1抗体
CTP2-CP4-EPSPS基因核酸检测试剂盒Epinastine HCl 盐依匹斯汀 质量规格:>97%
Epinastine HCl 盐依匹斯汀(标准品) 质量规格:>97%
Eplerenone 依普利 质量规格:>97%
Eplerenone 依普利(标准品) 质量规格:>97%
Etodolac 度 质量规格:>97%
Etodolac 度(标准品) 质量规格:>97%
Etonogestrel 孕烯 质量规格:>97%
Everolimus;RAD001 依维莫司 质量规格:>97%
FluocinoloneAcetonide 醋氟轻松;醋肤轻松 质量规格:>97%
FluocinoloneAcetonide 醋氟轻松;醋肤轻松(标准品) 质量规格:>97%
Flupirtinemaleate 马来氟吡汀 质量规格:>97%
Flupirtinemaleate 马来氟吡汀(标准品) 质量规格:>97%
Fulvestrant 氟维司群 质量规格:>97%
Gestodene 孕二烯 质量规格:>97%
Gestodene 孕二烯(标准品) 质量规格:>97%
PCR的反应条件:
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小,设定25~30个循环。
如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45~68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外,由于在60~68℃间,也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时,每kbp大体可设定30秒~1分钟;当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常,Anneal温度太高,有时会得不到扩增产物;Anneal温度太低时,容易发生非特异性反应。另外,Extension时间太短时,会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成;而Extension时间太长时,会出现Smear。