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技术服务内容:
实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳,以软件分析电泳条带的灰度值(IOD值),通过与内参基因的灰度值比较,判断目的mRNA的相对表达量。
产品名称 | |
英文名称 | Cladosporium carrioniiPCR |
编号 | FS-R1287 |
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
麦康凯琼脂培养基50克 HumanCarbohydrateaigen19-9,CA19-9ELISAKit人糖链抗原19-9(CA19-9)ELISA试剂盒规格:96T/48T
7790-84-3镉Cadmium sulfate octahydrate 人N端前脑素(-proBNP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
微晶纤维素板1克2~8℃ 兔诱导型合成酶(iNOS)免疫试剂盒 Rabbit inducible niic oxide syhase,iNOS ELISA KIT
苯硫醚 Diphenyl sulfide,98% 139-66-2 25G 通用试剂 清道夫受体B(SRB/CD36)ELISA试剂盒 ,英文名: SRB/CD36 ELISA Kit
醋洗矽藻土 DIcTOMcCqOUS qcRTH 68822-24-9 RabbitComplemefragme3a,C3aELISA试剂盒兔子补体片断3a(C3a)ELISA试剂盒规格:96T/48T
AEBSFAEBSF蛋白组学级白色至米白色结晶COLDsigma 大鼠胰岛细胞抗体(ICA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
7783-28-0磷酸氢二铵AMMoniuM Phosphate Dibasic (AS);DiaMMoniuM xy7nogen phosphate;DiaMMoniuM phosphate 人锌指蛋白RIZ(PRDM2)免疫试剂盒 Human PR domain zinc finger protein 2,PRDM2 ELISA Kit
DEPURINATIONSOLUTION去嘌呤溶液生物技术级透明无色溶液RTsigma 肌酸激酶测试盒 紫外分光光度法 50管/48样
2,2-二甲基琥珀酸酐 2,2-Dimethylsuccinic anhydride,98% 17347-61-4 1G 通用试剂 RatmajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/AgBⅢ/H-1ⅢELISA试剂盒大鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/AgBⅢ/H-1Ⅲ)ELISA试剂盒规格:96T/48T
噻孢霉素 (培养级) Cefotaxime sodium salt (cell culture t... 64485-93-4 100MG 通用试剂 Humanheat-labileeerotoxinBsubunit,LTBELISA试剂盒人不耐热肠毒素B亚单位(LTB)ELISA试剂盒规格:96T/48T
橙黄IV100克2~8°C 鱼(EPI)免疫试剂盒 Fish epinephrine/adrenaline,EPI ELISA kit
四甲基化铵 Tetramethylammonium chloride 75-57-0 25G 通用试剂 CLIAKitforPG(Humanpeptidoglycan)ELISAKit人肽聚糖规格:48T/96T
多聚蛋白胨 Polypeptone Null 250G 通用试剂 食物柠檬酸比色法定量检测试剂盒20次
结晶紫中性红胆盐琼脂shēng huà shì jì容量:150米 ELISAKitDSIP人促睡眠肽规格:48T/96T
111-85-31-录辛烷1-Chlorooctane 大鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒 ,英文名: PGE2 ELISA Kit
卡氏枝孢霉PCR检测试剂盒图片2-[(trimetxylsilyl)metxyl]Thiopxene 59321-65-2 体液基质金属蛋白酶(MMP-8)活性荧光定量检测试剂盒20次
2-异酸乙酯 2-Chloroethyl isocyanate,97% 1943-83-5 5G 通用试剂 ELISAKitMYO/MB犬肌红蛋白规格:48T/96T
N-芴氧碳酰基-2.2.4.6.7-五基二轻本并呋-5-磺酰-L-精安醋 Nc 大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Alkalinetransfersolution碱性转化液1克2.5N,200目 人脾脏酪氨酸激酶(Syk)免疫试剂盒 Human spleen tyrosine kinase,Syk ELISA Kit
3087-39-6四叔丁基钛酸酯Tetra-tert-butyl orthotitanate Mouseperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)ELISA试剂盒规格:96T/48T