PCR反应总RNA提取操作流程
时间:2024-09-09 阅读:130
PCR反应总RNA提取操作流程:
1、A组织样本:迅速将新鲜的组织切成合适的大小,在液氮中充分研磨后加裂解液裂解,或直接加入裂解液后用匀浆器匀浆。每30-50mg组织加1ml Trizol。
2、B全血样品:加入3-5倍体积的红细胞裂解液到血样中,室温孵育10min,室温3500rpm离心6min。弃上清,原每2-3ml全血样品加1mL Trizol。
3、C细胞样品:悬浮液中生长的细胞,通过离心收集细胞后,每1×105〜106细胞加入1mL Trizol,移液器吹打混匀,直接裂解或-80℃储存一个月。贴壁生长的细胞,有两种处理方法。一种是移除培养基后,将1mL Trizol直接加入直径3.5cm的培养皿中裂解细胞。或是先用yi 蛋白酶将贴壁细胞消化下来并收集后,再加入1mL Trizol进行裂解。(Note:加入Trizol前, PBS充分洗涤细胞去除残余培养基。)