加标回收率是实验室内部常用的质量控制技术，用于验证分析方法和操作过程的准确性和可靠性。它通过在样品中加入已知量的标准物质（即“加标”），然后测定其被检测出的比例来计算回收率。理想的回收率通常在90%～110%之间。

操作步骤详解

1、样品准备：

确保样品（如血清、血浆、细胞上清液等）在采集后迅速处理，避免溶血或污染，影响结果。

样品应按要求稀释，通常需要使用样品稀释液进行适当倍数的稀释。

样品应在2-8℃保存不超过一周，长期保存需置于-20℃。

2、试剂准备：

使用前将所有试剂恢复至室温，包括浓缩洗涤液应按说明书稀释使用。

确保洗涤液无沉淀，如有沉淀需充分溶解后使用。

3、实验检测：

使用ELISA试剂盒同时测定基础样本和加标样本，每个样本至少重复3次，取均值作为测定浓度。

4、加标方法选择：

‌前处理时加标‌：适用于基质效应小的样本，需对同一样本的高、中、低浓度回收率取平均值。

‌前处理后加标‌：可避免前处理干扰，需取3个不同样本，每个样本做平行样，低浓度取3个样本回收率的平均值。

5、‌回收率计算：‌

‌公式‌：回收率 = (测定回收样本浓度均值 - 测定基础样本浓度均值) / 加入浓度 × 100%。

‌合格标准‌：平均回收率应在80%-120%之间，板内/板间变异系数（CV）分别<10%和<15%。

6、关键注意事项

为确保结果有效，必须遵守以下原则：

加标物形态：应与待测物的化学形态相同（如离子态、分子态）。

加标量大小：尽量与样品中待测物含量相近，一般为0.5～2倍，不超过3倍。

加标体积：宜小，一般不超过原始试样体积的1%，避免改变基质。

加标时机：最好在样品前处理前加标，使其经历全过程。

浓度控制：加标后总浓度不应超过方法测定上限的90%。

为了提高加标回收率实验的可靠性，推荐每批样品随机抽取10%～20%进行测试。同时，应确保所有仪器已校准、操作规范统一，以减少人为误差。若回收率异常，应重点检查样品前处理是否充分、标准溶液配制是否准确以及是否存在交叉污染等问题。