冻存细胞：

1、选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前1d换液。

2、按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×10^7／ml左右密度，离心，去上清。

3、加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外。

4、分装于无菌冻存管中，每管加1.5m悬液。

5、旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记。

6、冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min时间内，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。

操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。